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- ZK-0021883
- 中国
- 2025年11月21日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 保质期：
1年
- 供应商：
再康生物
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 规格：
250 U
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文献和实验用 T4 标记的 5’ 末端 1． 无菌的 1.5ml 为了离心管置冰浴上顺序混合下列组分： 50 pmol 合成的寡核苷酸 2.5 μ l 10 ×反应缓冲液 10 μ l γ -[32 P]ATP （ 33pmol ） 1.5 μ l T4 多核苷酸激酶（ 15U ） 灭菌双蒸水加至 25 μ l 2． 37 ℃温育 30min 。 3． 当反应物正温育时，以 2000 × g 离心 2min 制备
。在这些情况下，仅有约10％的放射性标记物被转移，但实际上每个寡核苷酸分子都被标记。 2） 在反应混合液中加入8单位（约1 μl）T4噬菌体多核苷酸激酶。 充分混匀，于37 ℃温育45分钟。人该反应液中另取0.5 μl 加至另一装有10 10mmol/LTris.Cl(pH8.0)的反应管中，搁置一旁留备步骤3）使用。于68 ℃将其余的反应液加热10分钟，以灭活T4噬菌体多核苷酸激酶。 3） 按下列方法（Stawinski等，1977;Narang等，1980
我做NF-kB的EMSA实验方法和结果，条带不好，请大家指点！
。 （7）吸取上清，为核蛋白提取物。 （8）马上进行EMSA实验。 探针制备： 用γ-32P-ATP及T4多核苷酸激酶对合成的转录因子结合和突变型寡核苷酸的两条互补链分别进行末端标记。20 µl反应总体积中，加寡核苷酸10 pmol，10×T4多聚核苷酸激酶缓冲液2µl，γ-32P-ATP 3 pmol，T4多核苷酸激酶10 u，37 ℃反应45 min，再置于68 ℃ 10 min灭活。在离心管中加入退火反应液60 µl，互补配对的两条链的标记产物各20 µl，于95 ℃变性5min，缓慢降温
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