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文献和实验PriCells: 藻红蛋白标记抗体的方法﹠PE-标记蛋白A方法
藻红蛋白标记抗体的方法:1. 巯基化藻红蛋白(PE)的制备;(1)将600μl浓度为15.5mg/ml的盐酸巯醇亚胺加到1.2ml浓度为3.6mg/ml的PE中;(2)将以上混合液和1.2ml pH6.8的PB混合,而后装入透析袋置入50mmol/L pH6.8的PB中于4℃透析,过夜;(3)再换用pH7.5 PB透析6h。每个PE分子中可结合8个巯基;2. 巯基PE-IgG的制备;(1)将30μl浓度为1.1mg/ml的异双功能试剂SPDP的乙醇溶液,加入到700μl
物是为了检测抗体的结合,选择标记物依赖于几个参数:检测方法:荧光或着色沉淀,荧光标记物用特殊波长的光激发时发射出可见光,下表列出了几种荧光素的分子特征: 二抗连接标记酶HRP and AP 与其底物产生有颜色的沉淀物 封片介质(仅免疫组化),AEC、Fast Red、INT 或其它水性发光基团是可以醇溶的并要求水性封片。除上述之外的发光基团是有机的所以最好使用有机性封片介质。 荧光素标记物要求水性封片介质,藻红蛋白(藻青素 / 藻红素要求不添加
性捕获 Twin-Strep-tag® 融合蛋白 当光束射出后,对来自生物传感器末端表面的反射光进行测量,如果配体与分析物相互作用,则末端表面的膜层比仅有配体(未结合分析物)的膜层更厚,反射光波长也不同,两种反射光谱之间的波长形成一束干涉光谱。BLI 仪器通过测量来自配体,或配体-分析物的复合物的干涉光谱位移值,实现结合强度和动力学的实时监测。 邻近蛋白标记 BioID 邻近蛋白标记(biotin identification,BioID) 方法可以鉴定诱饵蛋白附近的蛋白质。通过将生物素连接
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