TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)

TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)

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  • ZK-0109010
  • 美国/中国
  • 2025年11月20日
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      上海再康

    TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)产品描述

    细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。

    TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)细胞凋亡检测试剂盒(FITC)可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶(Terminal Deozknucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因组DNA断裂时暴露出的3´-羟基(3´-OH)末端掺入FITC-12-dUTP,从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

    本试剂盒对标记反应进行了优化,采用最佳比例的FITC-12-dUTP和未标记dNTP进行3’-OH末端的核苷酸掺入,使得同一个断裂的DNA片段末端可以形成更长的“标记尾巴”。该“标记尾巴”减少了相邻掺入dNTP上标记基团的空间位阻,增加每个断裂片段上的荧光基团数目,降低荧光基团相邻后可能造成的聚集和淬灭,从而提高检测灵敏度,减少非特异性反应。

    本试剂盒应用范围广,可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况,也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。

    产品组分

    组分

    TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)产品编号/规格



    40306ES20(20T)

    40306ES50(50T)

    40306ES60(100T)

    5×Equilibration Buffer

    1.25 ml

    1.25 ml×2

    1.25 ml×3

    FITC-12-dUTP Labeling Mix

    100 μl

    250 μl

    250 μl×2

    Recombinant TdT Enzyme

    20 μl

    50 μl

    50 μl×2

    Proteinase K(2 mg/ml)

    40 μl

    100 μl

    100 μl×2

    运输与保存方法

    冰袋(wet ice)运输。

    本试剂盒储存在-20℃,FITC-12-dUTP Labling Mix避光储存于-20℃,保质期为一年。

    操作步骤

    TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)一、样品准备

    A. 石蜡包埋组织切片

    1.室温下将石蜡组织切片放入二甲苯中浸泡5min,重复一次,以彻底脱掉石蜡。

    2.室温下用100%乙醇浸泡切片5min,重复一次。

    3.室温下用梯度乙醇(90、80、70%)各浸洗1次,每次3min。

    4. 用PBS轻轻润洗切片,并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时,可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓,便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中,切勿让样品干燥,处理好的样本放在湿盒中保持样本的湿润。

    5. 配制Proteinase K工作液:按1:100的比例,用PBS作为稀释液来稀释2mg/ml的Proteinase K溶液,使其终浓度为20μg/ml。

    6.每个样本上滴加100μl上述Proteinase K工作液,使其被全部覆盖,室温孵育20min。

    注意:Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险,过短则可能造成透性处理不充分,影响标记效率。未得到更好的结果,可能需要优化Proteinase K孵育的时间。

    7.用PBS溶液润洗样本,轻轻去掉多余液体,并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中保存样本的湿润。

    B. 组织冰冻切片

    1. 将玻片浸没在4%多聚甲 醛 溶 液(溶于PBS)中固定,室温下孵育15min。

    2.轻轻去掉多余液体,并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。

    3.将玻片浸没在PBS溶液中,室温孵育15min。

    4.轻轻去掉多余液体,并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时,可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓,便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中,切勿让样品干燥,处理好的样本放在湿盒中保持样本的湿润。

    5.配制Proteinase K工作液:按1:100的比例,用PBS作为稀释液来稀释2mg/ml的Proteinase K溶液,使其终浓度为20μg/ml。

    6.每个样本上滴加100μl上述Proteinase K工作液,使其被全部覆盖,室温孵育10min。

    7.注意:Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险,过短则可能造成透性处理不充分,影响标记效率。未得到更好的结果,可能需要优化Proteinase K孵育的时间。

    8. 用PBS溶液润洗样本2-3次。

    9.轻轻去掉多余液体,并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中保存样本的湿润。

    C. 细胞爬片的准备

    在Lab-Tek载波片小室(Chamber Slides)上培养贴壁细胞。在凋亡诱导处理之后,用PBS洗2遍载玻片。

    D. 细胞涂片的制备

    1.准备多聚赖氨酸包被的载玻片:吸取50–100 μl 0.01% (W/V)多聚赖氨酸水溶液,滴至每一片预清洗过的玻璃载玻片的表面。在将要用于固定细胞的区域将多聚赖氨酸溶液涂散为一薄层。待载玻片晾干之后,迅速用去离子水漂洗,然后让包被后的载玻片在空气中晾干30-60分钟。包被后的载玻片能在室温储存数月。

    2.以约2×107个细胞/ml的浓度将细胞重悬于PBS中,吸取50-100μl细胞悬液滴于多聚赖氨酸包被的载玻片上,用一片干净的载玻片轻柔的涂开细胞悬液。

    3.固定细胞,将载玻片浸入装有4%新鲜配制于PBS中的多 聚 甲 醛的染色缸中,在4℃放置25min。

    4.洗涤载玻片,将其浸入PBS中,室温放置5min。重复用PBS洗一次。

    5.轻轻去掉多余液体,并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时,可用石蜡笔或指甲油在样品周围描绘样品分布的轮廓,便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中,切勿让样品干燥,处理好的样本放在湿盒中保持样本的湿润。

    6.配制Proteinase K工作液:按1:100的比例,用PBS作为稀释液来稀释2mg/ml的Proteinase K溶液,使其终浓度为20μg/ml。

    7.每个样本上滴加100μl上述Proteinase K溶液,使其被全部覆盖,室温孵育5min(也可浸于0.2%配制于PBS中的Triton X-100溶液中,室温孵育5min进行通透处理)。

    注意:Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险,过短则可能造成透性处理不充分,影响标记效率。未得到更好的结果,可能需要优化Proteinase K孵育的时间。

    8.在盛有PBS溶液的敞口烧杯中浸没清洗样本2-3次。

    9.轻轻去掉多余液体,并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中保存样本的湿润。

    二、DNA酶处理阳性对照的步骤(可选)

    在样本通透处理后,用DNA酶I处理细胞来准备阳性对照载玻片。DNA酶I处理固定的细胞会引起染色体DNA的断裂,产生许多可标记的DNA 3’-末端。该流程通常会引起被处理的大多数细胞显现绿色荧光。

    1.加入100μl DNA酶I缓冲液到固定的细胞中,室温孵育5min。

    2.轻叩掉液体,加入100μl含5.5-10 units/ml DNA酶I的缓冲液,室温孵育10min。

    3.轻叩载玻片去掉多余的液体,并将载玻片在装有去离子水的染色缸中彻底洗3-4次。

    注意:阳性对照载玻片必须使用单独的染色缸,否则,来自阳性对照载玻片上残余的DNA酶I活性可能会在实验载玻片上引入高的背景。

    三、标记与检测

    1.按1:5的比例用去离子水稀释5×Equilibration Buffer。

    2.每个样本滴加100μl 1×Equilibration Buffer使其全部覆盖待检样本区域,室温孵育10-30分钟。或者将载玻片放入一个含有 1×Equilibration Buffer的缸中,保证缓冲液没过样本。在平衡细胞的同时在冰上解冻FITC-12-dUTP Labling Mix,并且依照表1,准备足够量的用于所有实验的和可选阳性对照反应的TdT孵育缓冲液。对于面积小于5cm2的一个标准反应,其体积是50μl,用50μl乘以实验和阳性对照反应的数目来确定所需TdT孵育缓冲液的总体积。对于表面积更大的样本,可成比例的增大试剂体积。
    TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)
    zk1346 MelM 黑色素细胞培养基 Melanocyte Medium 500 ml ATCC
    zk1347 MelM-2 黑色素细胞培养基-2 Melanocyte Medium-2 500 ml ATCC
    zk1348 FM 成纤维细胞培养基 Fibroblast Medium 500 ml ATCC
    zk1349 FM-2 成纤维细胞培养基-2 Fibroblast Medium-2 500 ml ATCC
    zk1350 AEpiCM 肺泡上皮细胞培养基 Alveolar Epithelial Cell Medium 500 ml ATCC
    zk1351 SkMCM 骨骼肌细胞培养基 Skeletal Muscle Cell Medium 500 ml ATCC
    zk1352 EpiCM 上皮细胞培养基 Epithelial Cell Medium 500 ml ATCC
    zk1353 EpiCM-a 动物上皮细胞培养基 Epithelial Cell Medium-animal 500 ml ATCC
    zk1354 MCM 肾系膜细胞培养基 Mesangial Cell Medium 500 ml ATCC
    zk1355 ObM 成骨细胞培养基 Osteoblast Medium 500 ml ATCC
    zk1356 CM 软骨细胞培养基 Chondrocyte Medium 500 ml ATCC
    zk1357 SM 滑膜细胞培养基 Synoviocyte Medium 500 ml ATCC
    zk1358 NPCM 髓核细胞培养基 Nucleus Pulposus Cell Medium 500 ml ATCC
    zk1359 HM 肝细胞培养基 Hepatocyte Medium 500 ml ATCC
    zk1360 SteCM 星形细胞培养基 Stellate Cell Medium 500 ml ATCC
    zk1361 CMM 心肌细胞培养基 Cardiac Myocyte Medium 500 ml ATCC
    zk1362 TMCM 小梁网细胞培养基 "Trabecular Meshwork Cell Medium
    " 500 ml ATCC
    zk1363 TM 滋养层细胞培养基 Trophoblast Medium 500 ml ATCC
    zk1364 AdM 脂肪细胞培养基 Adipocyte Medium 500ml ATCC
    zk1365 PAM 前脂肪细胞培养基 Preadipocyte Medium 500 ml ATCC
    zk1366 PADM 脂肪细胞诱导分化培养基 Preadipocyte Differentiation Medium 500 ml ATCC
    zk1367 MSCM 间充质干细胞培养基 Mesenchymal Stem Cell Medium 500 ml ATCC
    zk1368 MODM-500 间充质干细胞-成骨细胞分化培养基 Mesenchymal Stem Cell Oseogenic Differentiation Medium 500 ml ATCC
    zk1369 MODM-250 Mesenchymal Stem Cell Oseogenic Differentiation Medium 250 ml ATCC
    zk1370 MADM-500 间充质干细胞-脂肪细胞分化培养基 Mesenchymal Stem Cell Adipogenic Differentiation Medium 500 ml ATCC
    zk1371 MADM-250 Mesenchymal Stem Cell Adipogenic Differentiation Medium 250 ml ATCC
    zk1372 MCDM 间充质干细胞-软骨分化培养基 Mesenchymal Stem Cell Chondrogenic Differentiation Medium 500ml ATCC
    zk1373 ATCC
    zk1374 ATCC
    zk1375 SMCM-sf 平滑肌细胞培养基 Smooth Muscle Cell Medium- serum free 500 ml ATCC
    zk1376 NPrCM 神经前体细胞培养基 Neural Precursor Cell Medium 500 ml ATCC
    zk1377 NM 神经细胞培养基 Neuronal Medium 500 ml ATCC
    zk1378 OPCM 少突胶质前体细胞培养基 Oligodendrocyte Precursor Cell Medium 500 ml ATCC
    zk1379 OsM 球状少突细胞培养基 Oligosphere Medium 500 ml ATCC
    zk1380 KM 角质细胞培养基 Keratinocyte Medium 500 ml ATCC
    zk1381 KM-d 角质细胞培养基(确定) Keratinocyte Medium-defined 500 ml ATCC
    zk1382 FM-sf 成纤维细胞培养基 Fibroblast Medium-serum free 500 ml ATCC

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