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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
50
- 英文名:
Cytosol Fractionation Kit
- 保质期:
有效期一年。
- 供应商:
上海再康生物科技有限公司
- 保存条件:
提取液 2-8℃保存;蛋白酶抑制剂-20℃保存。有效期一年。
- 规格:
50T;100T
产品简介
细胞核/胞浆分离试剂盒可以从哺乳动物细胞中分离细胞核和胞浆组分。此试剂盒提供了一个系统,维持核和胞浆组分是分开和完整的。优化的试剂配方和程序可以快速分离胞核和胞浆,而几乎没有交叉污染。
本试剂盒提取的胞核和胞浆组分仍保持其生化功能,适合下游分析如转录活性,RNA拼接,gel-shift 分析,报告分析,酶活性分析和 WB 等。
试剂盒以外自备试剂和仪器:
1)移液器、吸头
2)离心机及离心管
3)涡旋振荡器
4)冰箱,冰盒
注意事项
1. 本试剂盒仅供科学研究使用。
2. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
3. 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
6. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
7. 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
使用说明
1. 取 5-10×106 个细胞(细胞数量根据实验情况调整,每次的提取液用量并不是一定的,大约为细胞体积的 5-10倍即可,请根据实际情况调整),在 4℃,500×g 条件下离心 2-3 分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。【注】在 4℃,500×g 条件下离心 5 分钟。
3. 在细胞沉淀中加入 400μl 冷的提取液 A,涡旋振荡混匀或吹打混匀,置冰上振荡 30 分钟。(没有振荡条件的话,也可冰上静置,中间每隔 5 分钟涡旋振荡或吹打混匀。)
4. 在 4℃,1200×g 条件下离心 5 分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即得到胞浆组分,请置冰箱保存备用或直接用于下游实验。
6. 沉淀用 PBS 洗涤一次,然后在 4℃,2000×g 条件下离心 5 分钟,弃上清。
7. 沉淀为细胞核组分,将沉淀用 200μL 保存液 B 重悬后保存备用或直接用于下游实验。
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文献和实验核膜 nuclear membrane,nuclear envelope
位于真核生物的核与细胞质交界处的双层结构膜。核膜有两层同心圆形的薄膜,其厚度分别为 8— 10毫微米,这两层膜隔着宽约 15毫微米的电子密度低的空间,大致平行地排列着。膜上有与物质移动有关的许多核孔,核膜的外膜与内膜在这个部位上相连。有时,外膜与内质网的一部分相连接。核膜的这种基本结构,可因生物种类的不同而异。例如,绿藻类的角丝鼓藻只有一层核膜,但在变形虫和某种脊椎动物的细胞中,在核膜内侧则有第三层膜结构,即呈三层结构。另外,涡鞭虫类中的夜光虫有双层膜结构,但核膜上无核
500µl of Buffer A per large petri dish on ice and scrape thoroughly, leave on ice for 10 min (NP40 primarily lyses plasma membrane and leaves other membranes more intact than Triton X-100 does). 3. Centrifuge at 4o C at 3000 rpm for 10 min.
Nuclear Transfer to Study the Nuclear Reprogramming of Human Stem Cells
Research of stem cells will enable us to understand the development and function of tissues and organs in mammals. The ability to induce regeneration of new tissues from embryonic stem (ES) cells derived from cloned blastocysts via nuclear
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