TCEP (DTT Substitute)

TCEP即TCEP-HCl，全称Tris(2-carbozkethyl)phosphine hydrochloride，中文名为三(2-羧乙基)膦盐酸盐。分子式为C₉H₁₅O₆P·HCl，分子量为286.65，CAS号51805-45-9。本产品在大多数情况下可以作为DTT的替代物使用。

图1. TCEP-HCl的化学结构式。

      本产品为白色粉末，纯度≥98%，易溶于水，最高可达310mg/ml (1.08M)，在有机溶剂如乙醇、甲醇等中溶解度较小。TCEP直接溶解在水中时的pH约为2.5。
      TCEP是一种高效、无异味、不含硫醇基的水溶性还原剂，可选择性还原多肽或蛋白质中的二硫键。TCEP具有更佳的稳定性、更广的兼容性、更强的还原性、更好的选择性，而且由于不含巯基，因此在多数应用中不必去除，从而广泛应用于生物化学和分子生物学中，特别是在蛋白质化学、蛋白质组学中，是公认的DTT的良好替代物。
      TCEP对还原二硫键选择性极强，除半胱氨酸外，几乎不会与其它氨基酸有反应，并且能在更宽的pH值范围包括酸性条件下使用，从而有效减少酰胺键的水解。TCEP的反应活性温和、易溶、毒性小，且更容易操作，在酸性、碱性溶液中的稳定性都很好。
      TCEP使用范围广泛，无论是普通的SDS-PAGE中蛋白的还原，还是一些特殊的实验如固相金属离子亲和层析(IMAC)、质谱、Ni柱纯化等其它需要还原二硫键的实验，也特别适用于组氨酸标记蛋白纯化、马来酰亚胺偶联半胱氨酸残基反应，它能够预防半胱氨酸残基形成二硫键，但不像DTT或β-巯基乙醇本身易与马来酰亚胺反应。
      TCEP的特点有：无气味——与DTT和β-巯基乙醇不同，TCEP是无异味的，有助于创造更加健康的实验室环境；高效——5到50mM 的TCEP在数分钟内即可完全还原大多数多肽或蛋白的二硫键(与DTT等效)；特异性——选择性的完全还原甚至最稳定水溶液中的烷基化二硫键；快速——在室温和pH5的条件下，不到五分钟即可还原蛋白的二硫键；稳定——耐空气氧化，无挥发性，与蛋白的其它功能基团不反应；通用性——可在广泛pH范围、盐、去垢剂、温度条件下还原多肽和蛋白；兼容性——不含巯基，因此在多数应用中不必去除还原试剂。
      TCEP与DTT主要特点的比较表格如下：

      在SDS-PAGE电泳中，一般终浓度在25mM左右的TCEP即可足够还原蛋白样品。也可直接使用再康生物各类含TCEP的无气味的蛋白上样缓冲液(P0282、P0286、P0287、P0288、P0289、P0292)。
包装清单：

保存条件：
      -20℃或4℃保存，至少2年有效。室温保存，至少一年有效。
注意事项：
      本产品在磷酸盐缓冲液中，尤其在中性或碱性磷酸盐缓冲液中很不稳定。因此若实验过程需将本产品配制在PBS缓冲液中使用，必须现配现用。
      大多数蛋白无需变性剂即可高效还原，但加入盐酸胍等变性剂有助于将内部二硫键暴露而易于和TCEP发生反应。
      不建议使用尿素作为变性剂，避免形成酸酯并与巯基反应。
      尽量防止金属接触TCEP溶液，否则会一定程度降低TCEP活性。在还原过程中向样品缓冲液中加入5至20mM EDTA有助于防止巯基被二价金属离子氧化，如Zn²⁺、Cu²⁺和Mg²⁺等。
      还原后样品应尽快使用，长时间放置后会重新生成二硫化物。
      本产品在溶液中带电荷，因此不适用于等电聚焦(IEF)实验。
      TCEP对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。