- ¥145
- 再康生物/ZK-Bioscience
- ZK-0044668
- 进口/国产
- 2025年11月20日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
SmaI
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海再康生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存。
- 规格：
500U
SmaI内切酶为进口分装，基本信息如下：
| 识别序列 | 缓冲液兼容性(%) | 酶切温度 | 失活条件 | 甲基化干扰？ | |||||
| CCC^GGG GGG^CCC |
1X B | 1X G | 1X O | 1X R | 1X Y | 2X Y | 30℃ | 65℃ 20min |
有时有干扰 |
| 50-100 | 0-20 | 0-20 | 0-20 | 100 | 0-20 | ||||
根据识别序列邻近序列的不同，酶切效果受CG methylase导致的DNA甲基化的影响。
酶储存液组成为：10mM Tris-HCl(pH7.4 at 25℃)，100mM KCl，1mM DTT，1mM EDTA，0.2mg/ml BSA and 50% glycerol。
1X Buffer Y组成为：33mM Tris-acetate(pH7.9 at 37℃)，10mM magnesium acetate，66mM potassium acetate，
0.1mg/ml BSA。
酶切和连接效率：50倍过量的本内切酶消化1小时，>90%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(recut)。
活性单位定义：在37℃，50微升反应体系中反应1小时，将1微克的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位，即1U。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| ZK-6633-1 | SmaI(10U/μl) | 500U |
| ZK-6010Y | 10X Buffer Y | 1ml |
| － | 说 明 书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
如果发现预期的酶切位点不能切开，请确认是否存在甲基化干扰问题。
特别注意：
本SmaI的推荐孵育温度为30℃，37℃孵育有50%的酶活性，25℃孵育有100%的酶活性。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 单酶切时可以参考如下反应体系进行：
| 待酶切DNA | 不超过1μg |
| 双蒸水或Milli-Q水 | 适量 |
| 10X Buffer Y | 2μl |
| SmaI | 0.5-1μl |
| 总体积 | 20μl |
| 37℃孵育1小时或更长时间 | |
说明：请注意把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶，加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。通常参考上述条件孵育1小时已经足够，但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜，可以使用更少量的酶。待酶切DNA量较大时，可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。
2. 双酶切或多酶切时，需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液，然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择，可以在一种酶消化完毕后进行纯化，纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
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文献和实验The Minion Lab, College of Veterinary Medicine at Iowa State University http://mycoplasmas.vm.iastate.edu/lab_site/methods/DNA/SmaIvector.html
Methylation analyis using restriction enzyme digestion
. Since in eukaryotic DNA (or actually in mammalian DNA) only cytosine in CG context can be methylated, the restriction enzymes with CG sequences within their restriction sites come in question. Two classical enzyme pairs are HpaII - MspI (CCGG) and SmaI - XmaI (CCCGGG
。 由此题我发现，目的基因由两种限制酶切割，一端由EcoRI切出黏性末端，另一端由AluI切出平末端;载体质粒由两种限制酶切开，一端由EcoRI切出黏性末端，另一端由SmaI切出平末端。在构成重组 质粒时，两个黏性末端碱基互补，由DNA连接酶可以连接上磷酸二酯键，这没有疑议。但是另一端两个平末端也能由DNA连接酶连接上，并且原题中第(3)问“图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求? 。”答案为“否”。 也就是由此题我们可以得出一个结论：DNA连接
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