pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白)
pCMV-N-mCherry是再康生物自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含mCherry (DsRed的突变体,一种非常明亮的红色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个mCherry的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有mCherry标签的融合蛋白。利用mCherry的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用mCherry抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。mCherry与GFP没有序列同源性,不能使用GFP抗体检测mCherry。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-mCherry质粒的主要信息如下:
| Feature Nucleotide |
Position |
| CMV promoter |
1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site |
620-639 |
| mCherry |
677-1384 |
| Multiple cloning site |
1385-1474 |
| T7 promoter and T7 primer binding site |
1494-1515 |
| SV40 polyA signal |
1527-1910 |
| f1 origin of ss-DNA replication |
2048-2354 |
| bla promoter |
2379-2503 |
| SV40 promoter |
2523-2861 |
| Neomycin/kanamycin resistance ORF |
2896-3687 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal |
3688-4146 |
| pUC origin |
4275-4942 |
pCMV-N-mCherry质粒(4994bp)的图谱如下:
pCMV-N-mCherry的多克隆位点的详细图谱如下:
| SacI mCherry |
| 651 |
GAGCTCTAGC |
GCTACCGGTC |
|
TGAGCAAGGG |
|
| |
| |
CTCGAGATCG |
CGATGGCCAG |
|
ACTCGTTCCC |
|
| |
| 701 |
AACATGGCCA |
TCATCAAGGA |
GTTCATGCGC |
TTCAAGGTGC |
|
| |
| |
TTGTACCGGT |
AGTAGTTCCT |
CAAGTACGCG |
AAGTTCCACG |
|
| |
| 751 |
CTCCGTGAAC |
GGCCACGAGT |
TCGAGATCGA |
GGGCGAGGGC |
|
| |
| |
GAGGCACTTG |
CCGGTGCTCA |
AGCTCTAGCT |
CCCGCTCCCG |
|
| |
| 801 |
CCTACGAGGG |
CACCCAGACC |
GCCAAGCTGA |
AGGTGACCAA |
|
| |
| |
GGATGCTCCC |
GTGGGTCTGG |
CGGTTCGACT |
TCCACTGGTT |
|
| |
| 851 |
CTGCCCTTCG |
CCTGGGACAT |
CCTGTCCCCT |
CAGTTCATGT |
|
| |
| |
GACGGGAAGC |
GGACCCTGTA |
GGACAGGGGA |
GTCAAGTACA |
|
| |
| 901 |
GGCCTACGTG |
AAGCACCCCG |
CCGACATCCC |
CGACTACTTG |
|
| |
| |
CCGGATGCAC |
TTCGTGGGGC |
GGCTGTAGGG |
GCTGATGAAC |
|
| |
| 951 |
TCCCCGAGGG |
CTTCAAGTGG |
GAGCGCGTGA |
TGAACTTCGA |
|
| |
| |
AGGGGCTCCC |
GAAGTTCACC |
CTCGCGCACT |
ACTTGAAGCT |
|
| |
| 1001 |
GTGGTGACCG |
TGACCCAGGA |
CTCCTCCCTG |
CAGGACGGCG |
|
| |
| |
CACCACTGGC |
ACTGGGTCCT |
GAGGAGGGAC |
GTCCTGCCGC |
|
| |
| 1051 |
CAAGGTGAAG |
CTGCGCGGCA |
CCAACTTCCC |
CTCCGACGGC |
|
| |
| |
GTTCCACTTC |
GACGCGCCGT |
GGTTGAAGGG |
GAGGCTGCCG |
|
| |
| 1101 |
AGAAGAAGAC |
CATGGGCTGG |
GAGGCCTCCT |
CCGAGCGGAT |
|
| |
| |
TCTTCTTCTG |
GTACCCGACC |
CTCCGGAGGA |
GGCTCGCCTA |
|
| |
| 1151 |
GACGGCGCCC |
TGAAGGGCGA |
GATCAAGCAG |
AGGCTGAAGC |
|
| |
| |
CTGCCGCGGG |
ACTTCCCGCT |
CTAGTTCGTC |
TCCGACTTCG |
|
| |
| 1201 |
CGGCCACTAC |
GACGCTGAGG |
TCAAGACCAC |
CTACAAGGCC |
|
| |
| |
GCCGGTGATG |
CTGCGACTCC |
AGTTCTGGTG |
GATGTTCCGG |
|
| |
| 1251 |
TGCAGCTGCC |
CGGCGCCTAC |
AACGTCAACA |
TCAAGTTGGA |
|
| |
| |
ACGTCGACGG |
GCCGCGGATG |
TTGCAGTTGT |
AGTTCAACCT |
|
| |
| 1301 |
CACAACGAGG |
ACTACACCAT |
CGTGGAACAG |
TACGAACGCG |
|
| |
| |
GTGTTGCTCC |
TGATGTGGTA |
GCACCTTGTC |
ATGCTTGCGC |
|
| BamHIHindIII |
| |
| 1351 |
CCACTCCACC |
GGCGGCATGG |
ACGAGCTGTA |
|
AAGCTTCTGC |
| |
| |
GGTGAGGTGG |
CCGCCGTACC |
TGCTCGACAT |
|
TTCGAAGACG |
| |
| EcoRIEcoRVSalIBglIIXhoIXbaISpeIApaI |
| 1401 |
AGGAATTCGA |
TATCGTCGAC |
AGATCTCTCG |
AGTCTAGAAC |
TAGTGGGCCC |
| |
| |
TCCTTAAGCT |
ATAGCAGCTG |
TCTAGAGAGC |
TCAGATCTTG |
ATCACCCGGG |
pCMV-N-mCherry中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-mCherry)包括:
| AclI |
AflII |
AscI |
AsiSI |
BaeI |
BcgI |
BlpI |
| BmgBI |
BsiWI |
BsmBI |
BspEI |
BspQI |
BssHII |
BstXI |
| BstZ17I |
EarI |
EcoNI |
FseI |
NotI |
NruI |
PmeI |
| PmlI |
PpuMI |
PshAI |
PspXI |
SacII |
SapI |
ScaI |
| SmaI |
SwaI |
TspMI |
XmaI |
XmnI |
|
|
pCMV-N-mCherry中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-mCherry once)包括:
| NdeI |
CA`TA,TG |
240 |
|
BglII |
A`GATC,T |
1421 |
| SnaBI |
TAC|GTA |
346 |
|
PaeR7I |
C`TCGA,G |
1427 |
| CspCI |
,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` |
382 |
|
XhoI |
C`TCGA,G |
1427 |
| NheI |
G`CTAG,C |
597 |
|
XbaI |
T`CTAG,A |
1433 |
| BmtI |
G,CTAG`C |
597 |
|
SpeI |
A`CTAG,T |
1439 |
| SacI |
G,AGCT`C |
651 |
|
PspOMI |
G`GGCC,C |
1445 |
| Eco53kI |
GAG|CTC |
653 |
|
ApaI |
G,GGCC`C |
1445 |
| AfeI |
AGC|GCT |
660 |
|
PvuI |
CG,AT`CG |
1525 |
| AgeI |
A`CCGG,T |
664 |
|
BclI |
T`GATC,A |
1681 |
| AhdI |
GACNN,N`NNGTC |
871 |
|
MfeI |
C`AATT,G |
1774 |
| SbfI |
CC,TGCA`GG |
1032 |
|
HpaI |
GTT|AAC |
1787 |
| BbsI |
GAAGACNN`NNNN, |
1112 |
|
BtsI |
GCAGTG,NN` |
1861 |
| PflMI |
CCAN,NNN`NTGG |
1113 |
|
MluI |
A`CGCG,T |
1910 |
| BbvCI |
CC`TCA,GC |
1215 |
|
DraIII |
CAC,NNN`GTG |
2137 |
| Bpu10I |
CC`TNA,GC |
1215 |
|
SfiI |
GGCCN,NNN`NGGCC |
2796 |
| BsgI |
GTGCAG(N)14,NN` |
1269 |
|
ClaI |
AT`CG,AT |
2864 |
| SgrAI |
CR`CCGG,YG |
1358 |
|
BspDI |
AT`CG,AT |
2864 |
| XcmI |
CCANNNN,N`NNNNTGG |
1362 |
|
EagI |
C`GGCC,G |
2930 |
| BsrGI |
T`GTAC,A |
1377 |
|
Tth111I |
GACN`N,NGTC |
3142 |
| BamHI |
G`GATC,C |
1385 |
|
PflFI |
GACN`N,NGTC |
3142 |
| HindIII |
A`AGCT,T |
1391 |
|
BsrDI |
GCAATG,NN` |
3257 |
| EcoRI |
G`AATT,C |
1403 |
|
RsrII |
CG`GWC,CG |
3540 |
| EcoRV |
GAT|ATC |
1411 |
|
BstBI |
TT`CG,AA |
3706 |
| SalI |
G`TCGA,C |
1415 |
|
BsaI |
GGTCTCN`NNNN, |
4013 |
| AccI |
GT`MK,AC |
1416 |
|
PciI |
A`CATG,T |
4942 |
pCMV-N-mCherry质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
N-mCherry primer (1284-1303): 5′-AGTTGGACATCACCTCCCAC-3′
T7 primer (1494-1515): 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3′
pCMV-N-mCherry的全序列信息:D2711 pCMV-N-mCherry-seq.txt
pCMV-N-mCherry质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。
图1. pCMV-N-mCherry质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。
包装清单:
| 产品编号 |
产品名称 |
包装 |
| ZK-2711-1μg |
pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白) |
1μg |
| ZK-2711-100μg |
pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白) |
100μg |
| — |
说 明 书 |
1份 |
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注意事项:
本质粒未经再康生物书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
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