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上海再康
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Lewis
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株
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5.对于部分难培养的细胞我公司可代复苏细胞,并提供技术支持。
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文献和实验littleyan0418 我现在的任务是要构建人肺癌细胞的cDNA文库,但我不是这个方面科班出身,好多地方还不是很明白,想请教师兄师姐的经验,应该注意些什么。现在对总RNA的提取我有点找不出头绪。麻烦师兄师姐们可以给我分享些这方面的资料和网址吗?非常感谢!! neuronboy http://www.takara.com.cn/ 价格、试剂盒和说明书都有。呵呵 littleyan0418
我培养过不少肺癌细胞(人类),其中绝大部分都是贴壁细胞,具体如: (1) A549(肺腺癌) (2) NCIH446(小肺细胞癌) (3) 801(非小肺细胞癌) (4) NCIH460 (大细胞肺癌) 在消化传代过程中,步骤基本一致: 吸去旧的培养液->用Hanks'(1X)清洗一两次->加入一定量的消化液(Trpsin-EDTA)->置显微镜下观察,待细胞大部分变圆时,回到超静台->吸去消化液->加入一定量的新培养液->反复吹打细胞->再置显微镜下观察,直到细胞全部悬浮起来->
所需的D-HANK'S液和胰酶和用1640配置的适当浓度小牛血清最好都放在37度预热十分钟左右,让它们和细胞生长环境的温度是一样的。这样能达到既对细胞没有外来刺激的作用又能达到反应的最佳条件。我用的是小培养瓶,方法是:先把旧的培养液倒掉,用D-HANK'S大约3ml洗一次,加浓度为0.1%的胰酶进行消化,添加量只要能均匀的覆盖培养瓶底,大约要1.5ml,最好把瓶盖旋紧放到37度培养箱里培养3-5分钟,在显微镜下观察细胞收缩,变圆,加入3ml的10%的血清终止消化。小心仔细的吹打培养瓶底使细胞
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