转化的豚鼠胎体细胞

转化的豚鼠胎体细胞培养操作步骤：
培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml 冻存液的配置：DMSO18ml+胎牛血清2ml。 依次比例酌量配置。 超净工作台常规配置 移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精灯1盏，液器1台，斜架1台，酒精喷壶1个，酒精棉球缸1个，污缸1个， 常规耗材：培养瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），枪头（1ml、200μl、10μl），培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，保种管 转化的豚鼠胎体细胞 所需试剂：gibco高糖培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，苯扎溴氨，75%酒精…… 实验前准备： 所需的各项高压后的耗材放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。 首次传代前细胞的复苏，首先用一大烧杯盛满37℃的温水放于液氮罐旁边，待细胞株取出后留上端1/3于37℃水面上尽最大速摇动管使其在2min内迅速融化。若种管顶部含有冻存的细胞液在摇动期间用力甩动使其降于管底后再摇动。这一过程可在超净工作台外操作。
细胞培养应注意的问题：
细胞培养过程中，从实验室的设计到实验过程中的操作，都需要严格控制无菌。由于细胞对于生长的条件比较苛刻，所以无论从实验室的设计，还是使用的物品及细胞培养的操作过程，都要注意保持无菌环境。
冷冻保存细胞之方法：转化的豚鼠胎体细胞
冷冻保存方法一:冷冻管置于4°C30~60分钟→(-20°C30分钟*)→-80°C16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。 冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vaporphase长期储存。*-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡转化的豚鼠胎体细胞RWPE-2 人正常前列腺上皮细胞 RWPE-2细胞
RWPE-1 人正常前列腺上皮细胞 RWPE-1细胞
WPMY-1 人正常前列腺基质永生化细胞 WPMY-1细胞
JRDC049 人正常皮肤细胞 Hacat细胞
LGZC005 人正常肝细胞 LO2细胞
human QSG-7701 人正常肝细胞 human QSG-7701细胞
human L02 人正常肝细胞 human L02细胞
HL-7702 人正常肝细胞 HL-7702细胞
HBL-100 人整合SV40基因的乳腺上皮细胞 HBL-100细胞
LGZC004 人张氏肝细胞 Chang liver细胞
JRDC009 人原位胰腺腺癌细胞 BxPC-3细胞
BxPc-3-EGFP-puro 人原位胰腺腺癌细胞 BxPc-3-EGFP-puro细胞
HL-60 人原髓细胞白血病细胞 HL-60细胞
AL7P/HL-60R 人原髓细胞白血病细胞 AL7P/HL-60R细胞
293 Ad5+ 人原胚肾转化细胞系 293 Ad5+细胞
UT-7 人原巨核细胞型白血病细胞 UT-7细胞
HaCaT 人永生化表皮细胞 HaCaT细胞
LGZC011 人永生化鼻咽上皮细胞系 NP69细胞
HPAC 人胰腺腺泡上皮癌 HPAC细胞
Panc 10.05 人胰腺腺癌细胞 Panc 10.05细胞
AR42J 人胰腺细胞 AR42J细胞
PL45 人胰腺导管腺癌细胞 PL45细胞
SW 1990 人胰腺癌细胞系 SW 1990细胞
SFPAC-1 人胰腺癌细胞 SFPAC-1细胞
PSN1 人胰腺癌细胞 PSN1细胞
PC-3 人胰腺癌细胞 PC-3细胞，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度：
冷冻管内细胞数目一般为1x106cells/mlvial，融合瘤细胞则以5x106cells/mlvial为宜。
应如何避免细胞污染：
细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。
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