DNA尿素变性-PAGE电泳套装

中文名:DNA尿素变性-PAGE电泳套装

英文名:DNA尿素变性-PAGE电泳套装

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:见说明

产品简介

产品组成：

注意：

（APS）为固体粉末，使用前配制成10% APS溶液（0.1 g APS加1mL双蒸水）。APS溶液最好现配现用，通常4℃可保存一周，-20℃能保存半年。

 

操作步骤：

用于 SSCP-PCR 分析的非变性 PAGE 电泳（其他应用请相应修改参数）

一、PAGE 浓度和交联度的选择指南 

二、胶制备尿素-PAGE 胶（参照附表）

1．参照附表的配置合适浓度的PAGE胶，摇晃混匀。

2．将配置好的胶倒入胶板，在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。

3. 室温聚合 30-60 分钟（低温抑制聚合反应，故最好室温）。

4. 待胶凝固后拔出梳子，用 0.5×TBE 液冲洗加样孔。

三、样品处理

对一般样品、测序样品、微卫星 DNA、AFLP 样品、DDRT 样品、RPA 样品：将样品跟上样液 1:1 混合，95℃ 3 分钟变性，然后放冰上待用；对 TGGE 样品：可以直接上样。

四、电泳

1．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够 0.5×TEB 电泳液。

2．预电泳 5-30 分钟后，将冰上放置的样品上样。

3.  连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择功率（固定功率可以固定产热，这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压，产热都将随电泳时间而变化，不好控制）。对小胶一般用 5-6W 固定功率，大胶用 15-25W 固定功率。

4. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理（如银染）。注意：如果银染，必须延长固定时间以便洗出尿素，否则残留尿素会干扰后面的银染。

注意事项：

1. APS溶液不稳定，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换10% APS。

2. PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关；可通过改变APS及TEMED的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作。

3. 在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

4. 具有神经毒性，操作时请穿戴实验服和一次性手套。

附表：（单位：尿素g，其余为mL）

定做产品： 6% 的尿素-PAGE胶 500mL×2

配方：

1L 包含（420g 尿素，40% 19:1的 150mL，10×TBE 50mL，补水到1000mL）过滤避光保存。

附带：10×TBE 500mL×1

      2×尿素-PAGE上样液 5mL×1

      APS 100mg×5

      TEMED  4mL

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！