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- 详细信息
- 技术资料
- 靶点:
来电咨询
- 克隆性:
多克隆
- 标记物:
见 说 明 书
- 宿主:
Goat,Rabbit,Mouse
- 适应物种:
人,大鼠,小鼠,兔
- 形态:
液态/粉状
- 应用范围:
科研使用
- 浓度:
1mg/1ml
- 保存条件:
-20℃保存
Phospho-Stat1 (Ser727) Antibody提供各种一抗,二抗,单克隆,多克隆抗体以及不同蛋白的各种标记服务、各种纯化服务及载体蛋白连接服务,提供抗体、抗原亲和层析柱装配服务,欢迎来电咨询。
步骤:1. 分离胶和积层胶,制胶板;
注意:灌分离胶时不要加太多。
2. 蛋白变性:准备蛋白样本,Phospho-Stat1 (Ser727) Antibody加入等体积的2×上样Buffer稀释,置于沸水中煮10min(预染marker煮5min)
3. 加样:每孔加入20~40μl样品
4. 电泳:置于电泳槽中电泳45min,恒定电流90mA(2快板),如为一块板则电流为50 mA。
5. 取出胶板,用切割刀修好胶;
6. 将胶置于转膜液中浸泡;
7. 按顺序放好下列物质:黑面→海绵→滤纸→胶→NC膜→滤纸(用吸管赶去气泡)→海绵;
8. 置于转膜槽中于,黑面对黑面,加上冰块,加入转膜液;
9. 装好电极,于恒定电压100V下,90min;
10. 丽春红染膜;
11. Phospho-Stat1 (Ser727) Antibody用TBST洗去丽春红;
12. 封闭:加入5%脱脂奶粉+TBST,常温摇床摇1h;
13. 回收封闭液,加入一抗【一抗用5%BSA+TBS稀释】;
14. 置于4℃摇床摇过夜;
15. 回收一抗,TBST洗膜,10min,共3次;
16. 加入二抗【二抗用5%脱脂奶粉+TBS稀释】,常温摇床摇1h;
17. 回收二抗,TBST洗膜,10min,共3次;
18. 将膜置于发光液中浸泡约1min;
19. 将膜铺于曝光盒中,于暗室中曝光,洗胶片。
大规模单克隆抗体的生产目前主要有两种方式,Phospho-Stat1 (Ser727) Antibody一是腹水制备法,另一种是转瓶培养法。腹水制备法:将杂交瘤细胞株进行体外培养至一定浓度,再将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔中,产生腹水,从腹水中纯化单克隆抗体。每只小鼠可以产生3~8 mL腹水,抗体含量可以达到1~10 mg/mL。腹水制备的周期为3~4周。腹水制备法具备成本低、产量高,时间快等优点,是目前主要的大规模抗体生产方式。转瓶培养法:将杂交瘤细胞进行大规模体外培养,从培养基中纯化抗体。抗体含量可以达到20~80 mg/L。转瓶制备法具有抗体品质高、不含小鼠杂蛋白,不含动物病毒等优点。
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