Pin3Cas13b蛋白

Cas9-一种蛋白质可以控制所有蛋白质

(其中N为任意碱基)。这对于精确的基因编辑来说是一个明显的障碍——sgRNAs的长度是有限的，因此如果在基因组中没有PAM序列接近我们想要修改的位置，这可能根本就不可能。不出所料，许多研究都集中在扩展Cas9蛋白识别的PAMs序列上。Cas9的许多面貌事实证明，PAM并不是一种保守的特性——它对不同细菌种类的Cas9蛋白有不同的表现。另外一种Cas9可以用于基因组编辑已经被证明过几次了。在2013年的一篇早期CRISPR基因组编辑文章中，张峰、Luciano Marraffini及其同事描述了来自嗜

Nat Methods：陈玲玲/杨力/李劲松等开发新技术，实现环状 RNA 功能性筛选和研究

using the CRISPR-Cas13 system 的 circRNA 最新研究成果。 （图源：Nature Methods 官网）CRISPR-Cas13 系统，能否通过 gRNA 靶向 circRNA 的反向剪接位点（BSJ）实现区分 circRNA 和其同源线性 mRNA 尚未可知。为回答上述问题，研究团队首先对 Cas13 家族蛋白（Cas13a，Cas13b，Cas13d）进行筛选，确定 circRNA 敲除的效果。 （图源：Nature Methods 官网）分别验证

Cas9 蛋白过表达慢病毒包装

pLV-Cas9Nick-Neo 我们现提供 4 种表达 Cas9 蛋白的慢病毒载体，您可以根据抗生素要求和基因敲除实验设计进行选择。 1）抗生素选择：Puromycin 或 G418 用嘌呤霉素筛选比较快，仅需 4-7 天即筛选出阳性细胞。G418 筛选需要 7-14 天左右。此外不同的细胞对抗生素的敏感度差别很大。最好在开始实验前对细胞进行抗生素敏感度测试，以选择合适的抗生素种类，确定筛选浓度。 2）Cas9 蛋白选择：Cas9 和 Cas