IsoFast® 热启动 Bst 预混液

概述

将 Bst DNA 聚合酶与 AptaLock™ 可逆热启动技术相结合，构成了我们的 IsoFast® 热启动 Bst 试剂。这些产品非常适合所有等温扩增流程，能够以更快的速度提供更灵敏、更可靠的结果。

IsoFast® 热启动 Bst 聚合酶是嗜热脂肪地芽孢杆菌（先前称为嗜热脂肪芽孢杆菌，Bst）DNA 聚合酶大片段的重组版本。它经过工程化改造，保留了 5'→3' 的聚合酶活性，但缺乏 5'→3' 的外切核酸酶活性。该酶强大的链置换能力消除了标准 PCR 所需的变性步骤。结合强大的热启动技术，可最大限度地减少引物二聚体形成和非特异性靶标扩增，这种新颖的配方非常适合基于非 PCR 的扩增。​

IsoFast® 热启动 Bst 聚合酶 & 预混液是等温扩增技术新且改进的开发成果，旨在提供好的特异性和速度。无论您正在进行环介导等温扩增（LAMP）还是其他等温扩增方法，IsoFast® 热启动 Bst 试剂都能保证卓越的灵敏度和可靠性。我们的试剂利用了热启动 Bst DNA 聚合酶的力量，可确保极低的背景扩增并最大化靶标特异性。使用 IsoFast® 热启动，您的等温扩增实验在诊断和研究应用中都将比以往更快、更高效、更简单。

IsoFast® Hot Start Bst Polymerase is a recombinant version of the large fragment of Geobacillus stearothermophilus (formerly known as Bacillus stearothermophilus, Bst) DNA Polymerase. It is engineered to retain 5’-3’ polymerase activity, but lacks 5’-3’ exonuclease activity. The enzyme’s strong strand displacement capability eliminates the need for denaturation required by standard PCR. Combined with powerful hot start technology, to minimise primer dimer formation and non-specific target amplification, this novel formulation is ideal for non-PCR based amplification

IsoFast® Hot Start Bst Polymerase & Mix are the most recent and improved development of isothermal amplification technology, designed to deliver unparalleled specificity and speed. Whether you are working with loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or other isothermal amplification methods, IsoFast® Hot Start Bst reagents guarantee exceptional sensitivity and reliability. Our reagents harness the power of a hot start Bst DNA polymerase enzyme, which ensures minimal background amplification and maximises target specificity. With IsoFast® Hot Start, your isothermal amplification experiments will be faster, more efficient, and easier than ever in both diagnostic and research applications.

​特点​

• AptaLock™ 热启动技术，用于超灵敏检测 DNA 靶标

• 快速聚合，可更快获得结果（最快仅需 10 分钟）

• 可检测低至每微升 3 个靶标拷贝

• 适用于低温及室温条件下进行反应体系配制

• 提高的速度和灵敏度，有助于早期靶标检测

• 在 55-70°C 的宽温度范围内具有高活性

• 提供含荧光染料和不含染料的形式，以及即用型 2x 预混液

• 提供适用于比色法的制剂。

​应用​

• 全基因组扩增

• 多重置换扩增

• 滚环扩增

• 等温扩增

• 环介导等温扩增（LAMP）

• 分子诊断

• 即时检测

​等温扩增中的热启动​

热启动在等温扩增技术中非常重要，因为它有助于防止非特异性扩增和假阳性结果。等温扩增方法，如环介导等温扩增（LAMP），依赖于特异性引物和酶在恒定温度（通常为 60°C 至 65°C）下扩增靶序列。这些技术广泛应用于各种领域，包括分子诊断和病原体检测。

​为什么热启动在等温扩增中至关重要？​​

• ​防止 Bst 聚合酶等温反应中的非特异性扩增：​​ 在等温扩增中，必须确保扩增过程仅针对目标特异性序列。当引物与模板的非预期区域结合，或扩增酶过早启动扩增时，就会发生非特异性扩增。热启动技术通过抑制扩增反应直至达到所需温度来实现。这可以防止在反应初始阶段、温度仍低于最佳扩增温度时形成非特异性产物。

• ​增强 Bst 聚合酶等温扩增的特异性：​​ 通过防止过早扩增，热启动方法提高了等温扩增反应的特异性。这意味着反应扩增非靶序列的可能性降低，从而减少了假阳性结果的风险。

• ​提高 Bst 聚合酶等温扩增的灵敏度：​​ 热启动技术还可以提高等温扩增分析的灵敏度。通过最大限度地减少非特异性扩增，更多的可用试剂被用于扩增靶序列，从而提高了反应的效率和检测限。

​IsoFast 热启动 Bst 与 IsoFast Bst 获得结果的时间对比

使用 IsoFast 热启动 Bst 预混液和 IsoFast Bst 预混液对 M13 噬菌体基因组支架蛋白基因中的靶序列进行等温扩增。使用的引物混合物包含 0.2 µM 的 F3 和 B3 引物，1.6 µM 的 FIP 和 BIP 引物，以及 0.8 µM 的 LoopF 和 LoopB 引物。总反应体积为 25 µL。使用了 8 个 M13 单链 DNA 基因组的系列稀释液，起始浓度为 0.5 ng/µL，稀释倍数为 10，对应于图中指示的基因组拷贝数。反应在 65°C 下运行 100 分钟。使用 BioRad CFX96 Touch 仪器每 10 秒记录一次荧光。达到阈值时间指达到相同荧光阈值所需的时间。与 IsoFast Bst 预混液相比，IsoFast 热启动 Bst 预混液显示出更快的扩增速度。​

Isothermal amplification of a target sequence in the scaffolding protein gene from the M13 bacteriophage genome using IsoFast Hot Start Bst Mix and IsoFast Bst Mix. A primer mix consisting of 0.2 µM for F3 and B3 primers, 1.6 µM for FIP and BIP primers and 0.8 µM for LoopF and LoopB primers was used. The total reaction volume was 25 µL. 8 serial dilutions of M13 ssDNA genome were used, starting with a stock of 0.5 ng/µL and using a dilution factor of 10, corresponding to the number of genome copies indicated in the plot. The reaction was run at 65°C for 100 minutes. A BioRad CFX96 Touch instrument was used to record fluorescence every 10 seconds. The time to threshold indicates the time required to reach the same fluorescent threshold. IsoFast Hot Start Bst Mix shows faster amplification when compared to IsoFast Bst Mix.

​低温条件下配制反应体系时 IsoFast 热启动与 NEB Warmstart 获得结果的时间对比​

使用 IsoFast 热启动 Bst 预混液和 NEB WarmStart LAMP 试剂盒对 M13 噬菌体基因组支架蛋白基因中的靶序列进行等温扩增。使用的引物混合物包含 0.2 µM 的 F3 和 B3 引物，1.6 µM 的 FIP 和 BIP 引物，以及 0.8 µM 的 LoopF 和 LoopB 引物。总反应体积为 25 µL。使用了 8 个 M13 单链 DNA 基因组的系列稀释液，起始浓度为 0.5 ng/µL，稀释倍数为 10，对应于图中指示的基因组拷贝数。使用冰盒（低温条件配制）制备反应主混合物和板，持续时间约 20 分钟。反应在 65°C 下运行 100 分钟。使用 BioRad CFX96 Touch 仪器每 10 秒记录一次荧光。达到阈值时间指达到相同荧光阈值所需的时间。当在低温条件下配制反应体系时，IsoFast 热启动 Bst 预混液显示出比 NEB WarmStart LAMP 试剂盒更快的扩增速度。

​Isothermal amplification of a target sequence in the scaffolding protein gene from the M13 bacteriophage genome using IsoFast Hot Start Bst Mix and NEB WarmStart LAMP Kit. A primer mix consisting of 0.2 µM for F3 and B3 primers, 1.6 µM for FIP and BIP primers and 0.8 µM for LoopF and LoopB primers was used. The total reaction volume was 25 µL. 8 serial dilutions of M13 ssDNA genome were used, starting with a stock of 0.5 ng/µL and using a dilution factor of 10, corresponding to the number of genome copies indicated in the plot. Reaction master mixes and plates were prepared using cold blocks (Cold Setup), for approximately 20 min. The reaction was run at 65°C for 100 minutes. A BioRad CFX96 Touch instrument was used to record fluorescence every 10 seconds. The time to threshold indicates the time required to reach the same fluorescent threshold. IsoFast Hot Start Bst Mix shows faster amplification when compared to NEB WarmStart LAMP Kit, when reactions are setup at cold temperatures.

室温条件下配制反应体系时 IsoFast 热启动与 NEB Warmstart 获得结果的时间对比​

使用 IsoFast 热启动 Bst 预混液和 NEB WarmStart LAMP 试剂盒对 M13 噬菌体基因组支架蛋白基因中的靶序列进行等温扩增。使用的引物混合物包含 0.2 µM 的 F3 和 B3 引物，1.6 µM 的 FIP 和 BIP 引物，以及 0.8 µM 的 LoopF 和 LoopB 引物。总反应体积为 25 µL。使用了 8 个 M13 单链 DNA 基因组的系列稀释液，起始浓度为 0.5 ng/µL，稀释倍数为 10，对应于图中指示的基因组拷贝数。在室温下（室温条件配制）制备反应主混合物和板，持续时间约 20 分钟。反应在 65°C 下运行 100 分钟。使用 BioRad CFX96 Touch 仪器每 10 秒记录一次荧光。达到阈值时间指达到相同荧光阈值所需的时间。当在室温条件下配制反应体系时，IsoFast 热启动 Bst 预混液显示出比 NEB WarmStart LAMP 试剂盒更快的扩增速度。Isothermal amplification of a target sequence in the scaffolding protein gene from the M13 bacteriophage genome using IsoFast Hot Start Bst Mix and NEB WarmStart LAMP Kit. A primer mix consisting of 0.2 µM for F3 and B3 primers, 1.6 µM for FIP and BIP primers and 0.8 µM for LoopF and LoopB primers was used. The total reaction volume was 25 µL. 8 serial dilutions of M13 ssDNA genome were used, starting with a stock of 0.5 ng/µL and using a dilution factor of 10, corresponding to the number of genome copies indicated in the plot. Reaction master mixes and plates were prepared at room temperature (Ambient Setup), for approximately 20 min. The reaction was run at 65°C for 100 minutes. A BioRad CFX96 Touch instrument was used to record fluorescence every 10 seconds. The time to threshold indicates the time required to reach the same fluorescent threshold. IsoFast Hot Start Bst Mix shows faster amplification when compared to NEB WarmStart LAMP Kit, when reactions are setup at ambient temperatures.