二十一烷酸甘油三酯 CAS 26536-14-1

张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

. Horvath P, Barrangou R (2010) CRISPR/ Cas, the immune system of bacteria and archaea. Science 327(5962):167–170. doi: 10. 1126/science.1179555 14. Makarova KS, Haft DH, Barrangou R, BrounsSJ, Charpentier E, Horvath P, Moineau S,Mojica FJ, Wolf YI

手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因

DNA 修复方式，这会造成 DNA 的删除和插入。对于基因敲入，加入一个可同源重组的 DNA 片段, 细胞会将这个一段 DNA 片段插入进基因组 。二、两次切割介导的基因敲除与先前的敲除策略并不一样，我们改进的这个操作系统可以将基因的删除做到可控的特定长度。我们正在基因组的一个特定的区域两边各引入一个向导性 RNA。这两个向导性 RNA 指引 Cas9 酶在这两个位点进行切割。然后切割后末端通过 NHEJ 连接上。通过这个策略，我们可以将一个基因的独立外显子或者整个基因敲除掉。如图 2 所示。图

Cas9 蛋白过表达慢病毒包装

pLV-Cas9Nick-Neo 我们现提供 4 种表达 Cas9 蛋白的慢病毒载体，您可以根据抗生素要求和基因敲除实验设计进行选择。 1）抗生素选择：Puromycin 或 G418 用嘌呤霉素筛选比较快，仅需 4-7 天即筛选出阳性细胞。G418 筛选需要 7-14 天左右。此外不同的细胞对抗生素的敏感度差别很大。最好在开始实验前对细胞进行抗生素敏感度测试，以选择合适的抗生素种类，确定筛选浓度。 2）Cas9 蛋白选择：Cas9 和 Cas