美沙比妥 CAS 50-11-3

搞定 CRISPR/Cas9 系统操作

CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具，今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作，仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒，如下图所示： 酶切系统 37 ℃, 3 hr；Run 1% gel，回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端，以利于下游 oligo 退火产物的连接；酶切时请充分，且绝对不能加 CIP 处理

张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

最近，随着基因编辑技术不断曝光，这项技术也越来越火，越来越受到关注，但大部分媒体都只是浅尝辄止进行宣传而已，实质性的怎么操作，具体的步骤却很少涉及。鉴于此，师兄就把张峰的手稿扒拉出来，分享给大家。同时也欢迎大家与我探讨，我的微信号;shixiongcoming，向我申请的时候注意，写上你的理由哦，最近加我的人太多，不注明来由的读者，别怪师兄拒绝你呦。   Genome Engineering Using CRISPR-Cas9 System Le Cong

4.11 丁香实验科研资讯早报（每日更新）

，而对病患 及其家属而言更是艰难和痛苦。这种遗传性疾病是由基因COL7A1的突变引起的，该基因编码代表的7号胶原蛋白是黏连真皮和表皮所必需 的蛋白质。在西班牙，基因的外显子80存在着极高的突变可能性（存在于大约50％的西班牙患者基因中 ），这证明了针对该基因区域的精确疗法发展是正确的。一组研究人员使用CRISPR/Cas9工具对基因进行重组编辑，纠正患者细胞比例 （超过80％）高得异常的一个基因，结果证明这一工具可准确、安全地去除来自患者皮肤干细胞致病突变基因COL7A1外显子80，使重新编辑的细胞