反式-10-十八碳烯酸甲酯 CAS 13038-45-4

张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

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5 分钟学会 cas9 基因敲除——原来设计方案如此简单

CRISPR/Cas9 系统作为细菌和古细菌的获得性免疫系统， 通过 RNA 介导特异性的切割外源遗传物质， 用以对抗入侵的病毒和质粒。利用 Cas9 来摧毁入侵 DNA 的 Type Ⅱ CRISPR/Cas 系统， 可以在体外进行基因的编辑。为了提高CRISPR/Cas9 的特异性，使用 Cas9 切口酶和一对 sgRNA，两个相近的切口造成 DNA 双链断裂， 诱导细胞发生非同源末端连接修复， 造成目的基因的突变。利用 CRISPR/Cas9 进行基因的编辑，首先要构建有效的 sgRNA

Cas9 蛋白过表达慢病毒包装

9Nicknase Cas9 蛋白切割 DNA 双链。Cas9Nicknase 是 Cas9 蛋白的 D10A 突变体，切割 DNA 单链。由于 DNA 上的 Nick 缺口会很快被细胞修复，一般不会造成基因突变。Cas9Nicknase 需要成对的 gRNA 辅助才能实现 DNA 双链断裂。 采用 Nicknase 蛋白可以提高基因敲除的特异性，但是对 gRNA 的设计要求较高。敲除效率也比 Cas9 蛋白低一些。 简单地说，Cas9 基因敲除效率更高，操作更容易；Cas9Nicknase