双酚F-D10 CAS 1794786-93-8

张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

最近，随着基因编辑技术不断曝光，这项技术也越来越火，越来越受到关注，但大部分媒体都只是浅尝辄止进行宣传而已，实质性的怎么操作，具体的步骤却很少涉及。鉴于此，师兄就把张峰的手稿扒拉出来，分享给大家。同时也欢迎大家与我探讨，我的微信号;shixiongcoming，向我申请的时候注意，写上你的理由哦，最近加我的人太多，不注明来由的读者，别怪师兄拒绝你呦。   Genome Engineering Using CRISPR-Cas9 System Le Cong

Cas9 蛋白过表达慢病毒包装

9Nicknase Cas9 蛋白切割 DNA 双链。Cas9Nicknase 是 Cas9 蛋白的 D10A 突变体，切割 DNA 单链。由于 DNA 上的 Nick 缺口会很快被细胞修复，一般不会造成基因突变。Cas9Nicknase 需要成对的 gRNA 辅助才能实现 DNA 双链断裂。 采用 Nicknase 蛋白可以提高基因敲除的特异性，但是对 gRNA 的设计要求较高。敲除效率也比 Cas9 蛋白低一些。 简单地说，Cas9 基因敲除效率更高，操作更容易；Cas9Nicknase

基因组编辑技术应用于作物遗传改良的进展（上篇）

” 两把效果一样但又能互补的 “剪刀”，作为 “厨师” 的我们，只要能达到我们的目标，选择任一 “剪刀” 都可。1.5 利用 CRISPR/Cas 系统在基因组编辑方式上的技术创新1.5.1 植物基因组单碱基编辑系统创新和应用单碱基突变可引起作物许多农艺性状的改变，因此，实施单碱基编辑对作物遗传改良具有十分重要的意义。2016 年 5 月，《Nature》报道了 KOMOR 等将大鼠胞嘧啶脱氨酶 (APOBEC1，一种碱基修饰酶能改变 DNA 序列)、Cas9 变体 (D10A) 和尿嘧啶糖