UltraScript® cDNA 合成试剂盒（含独立寡核苷

产品概述​

UltraScript® 逆转录酶是一种经过改造的、强健且热稳定的MMLV逆转录酶，旨在提高cDNA合成的速度、产量以及转录本代表的准确性。该酶能够高灵敏度地逆转录总RNA、poly A+ RNA和病毒RNA序列，是RT-qPCR检测分析的理想组分。可作为独立酶提供，也可作为即用型预混液提供（包含逆转录酶、缓冲体系，并可选择性地包含经过优化的随机六聚体与锚定oligo(dT)引物的混合物）。所有产品配方均包含预混的强效RNase抑制剂，以确保模板RNA的完整性并减少移液操作。​

UltraScript® 逆转录酶是一种用于cDNA合成的热稳定且高活性的经改造MMLV逆转录酶。其反应温度可提高至55°C，从而提供更高的特异性，并能高效转录具有高级结构的高GC含量RNA区域。该逆转录酶与先进的RNase抑制剂混合，可防止污染物RNase降解RNA。UltraScript® 逆转录酶不受核糖体RNA和转移RNA的抑制，因此总RNA是其理想底物。

​特性​

1. 无偏性地代表mRNA转录本的5'和3'末端

2. 降低的RNase H活性

3. 热稳定性逆转录酶（反应温度45°C至55°C）

4. 包含先进的RNase抑制剂

5. 可从低至4 pg的模板RNA获得高cDNA产量

6. 精确逆转录高GC含量模板

7. 灵敏检测低拷贝数转录本

8. 先进的缓冲化学配方（含镁离子和dNTPs）

9. 提供预混引物或引物分离的cDNA合成试剂盒

​应用​

1. 随机六聚体引物、oligo(dT)引物和基因特异性引物

2. 用于实时荧光定量PCR分析的cDNA合成

3. 用于PCR分析、克隆、文库制备和新一代测序的cDNA合成

4. 低拷贝数转录本

5. 病毒RNA靶标

6. miRNA靶标

7. 可高效合成自总RNA或poly(A)+ RNA

​热稳定性分析​

通过Sypro Orange荧光测定法检测UltraScript逆转录酶的热稳定性。将蛋白与Sypro Orange染料共孵育，并逐渐升高温度。随着蛋白解链，荧光强度增加，解链温度是指50%蛋白发生解链时的温度。DSF曲线展示了浓度为0.1mg/ml的UltraScript逆转录酶（紫色）和野生型MMLV RT（黑色）。实验表明，UltraScript逆转录酶的解链温度为54.9±0.3°C，比野生型酶高9.3°C，表明其热稳定性更高，在反应过程中更可能保持活性。因此，当目标RNA区域含有高级结构（GC含量>65%）时，可使用高达55°C的孵育温度。

​The thermostability of UltraScript Reverse Transcriptase was measured using the Sypro Orange fluorescence assay. The protein is incubated with Sypro Orange dye and the temperature gradually increased. The fluorescence intensity increases as the protein unfolds and the melting point is the temperature where 50% of the protein is unfolded. The DSF curve shows UltraScript Reverse Transcriptase (purple) and wildtype MMLV RT (black) at 0.1mg/ml. This experiment shows that UltraScript Reverse Transcriptase unfolds at 54.9±0.3°C, which is 9.3°C higher than the wildtype enzyme, indicating it is more thermostable and more likely to remain active during the reaction. As a result, where RNA regions of interest contain high secondary structure (>65% GC), incubation temperatures of up to 55°C can be used.

生成高cDNA产量​

使用UltraScript逆转录酶（紫色）和竞争品牌预混液（蓝色），以100ng小鼠肝脏总RNA为模板合成cDNA。添加5μM oligo-dT(18)和5μM随机六聚体作为引物。反应在42°C下孵育10分钟。使用qPCRBIO SyGreen Mix对所得cDNA进行定量。在相同时间内，UltraScript逆转录酶产生的cDNA量是对手产品的10倍以上。

​Generation of high cDNA yields: cDNA was created from 100ng of total RNA from mouse liver using UltraScript Reverse Transcriptase (purple) and a competitor mix (blue). 5μM oligo-dT(18) and 5μM random hexamers were added as primers. The reaction was incubated for 10 minutes at 42°C. The resulting cDNA was quantified using qPCRBIO SyGreen Mix. UltraScript Reverse Transcriptase created >10x more cDNA than the competitor in the same amount of time.

灵活的产品形式​

该酶随附5x缓冲液（含镁离子、dNTPs、稳定剂和增强剂），经过优化，可从低至4 pg的RNA生成高产量的cDNA。由于不包含引物，UltraScript® 逆转录酶为用户提供了便利性和灵活性，可根据所需分析类型自定义引物策略。UltraScript® 逆转录酶与基因特异性引物、oligo(dT)引物和随机六聚体引物配合使用，均能表现出卓越性能，产生适用于各种下游应用的高质量cDNA。

​用于qPCR的cDNA合成试剂盒​

我们强大的逆转录酶也提供高浓度形式，以及即用型UltraScript® cDNA合成试剂盒形式，其中随机六聚体和锚定oligo(dT)引物的相对浓度经过优化，适用于实时荧光PCR实验中的cDNA合成。这消除了用户对关键逆转录反应因素（如引物策略、逆转录酶、缓冲液和增强剂）进行优化的需要，每次都能实现无偏好、高效且灵敏的cDNA合成。

​为您的应用选择合适的产品

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