Clara® Probe 一步法预混液 Purple Mix

​产品描述​

Clara® Probe 一步法预混液和一步法紫色预混液确保RT-qPCR检测不再具有挑战性。这款新型单管RT-qPCR预混液适用于基于探针的RNA和DNA靶标的单重及多重检测。

这种经过精心优化的4x浓度RT-qPCR预混液将最高的灵敏度与易用性相结合，可简化RT-qPCR工作流程。因此，该预混液在扩增DNA或RNA时均无效率损失，非常适合于需要检测两种类型靶标但无需分别使用不同qPCR试剂的用户。该产品还提供无色和紫色两种规格，便于肉眼观察预混液体系。如需用于粗提唾液或血液样本并具有广谱抑制剂耐受性，请尝试我们的Clara® 耐抑制剂探针一步法预混液。

​特点​

1. 4x浓缩预混液形式，适用于高通量、高度多重检测

2. 对RNA和DNA靶标进行超灵敏检测

3. 可早期检测各种范围的模板量

4. 含有经过修饰的UltraScript® 逆转录酶，为单管形式

5. 高级RNase抑制剂

6. 抗体介导的热启动技术

7. 兼容所有实时荧光定量PCR平台 – 标准和快速循环条件

8. 提供含惰性紫色染料的规格，便于加样时肉眼观察

​应用​

1. 基因表达分析

2. 基因分型

3. 等位基因分辨

4. 体外诊断试剂盒开发

5. 单重及多重RNA和DNA检测

概述​

​探针法一步法qPCR预混液 – 结果清晰，结论可靠​

Clara® Probe 一步法预混液能够在诊断应用和基础研究中实现具有最高灵敏度、可靠性且最易用的qPCR和一步法RT-qPCR。它是一种通用的qPCR预混液，适用于所有类型的探针技术，包括TaqMan探针、Scorpions探针和分子信标。这是我们第一代"all-in-one"一步法RT-qPCR预混液，其中DNA聚合酶和逆转录酶均包含在同一预混液中。Clara® Probe 一步法预混液采用我们独特的热启动Taq DNA聚合酶和经过特殊修饰的高性能、耐热UltraScript® 逆转录酶。开发过程中的严格测试使该预混液高度适用于单重和多重检测，无论您检测单个靶标还是同时检测多个靶标，都能实现高效率和灵敏的检测。

该预混液也适用于熔解曲线分析（仅限杂交探针），并可提供不含被动参比染料（无ROX），或含低ROX、高ROX、独立ROX以及AquaPlex配方。请使用我们的qPCR选择工具来查找与您的仪器兼容的ROX变体。

AquaPlex配方设计采用适用于红色（Cy5, 650 nm）检测通道的被动参比染料，从而能够在通常用于ROX检测的通道中使用探针染料进行监测。这使得在多重检测中能产生更优化的信号和更高质量的数据。

获得最大易用性​

我们专利的缓冲液组成（通过智能筛选技术确定）和独特修饰的UltraScript® 逆转录酶使得该预混液可以"all-in-one"的RT-qPCR预混液形式储存于单管中。这减少了加样所需的移液步骤，降低了污染风险，并节省了时间。这也意味着一种试剂即可用于DNA和RNA的扩增，并且两种靶标类型可以置于同一板或同一次运行中。使用一种预混液意味着，即使您主要研究RNA靶标但仍需进行DNA定量时，也无需采用不同的实验方案。

虽然同时检测大量两种靶标类型的用户可能更倾向于为每种靶标类型配备专用试剂，但Clara® Probe 预混液是专门为DNA和cDNA的探针法检测而开发的。

​便于观察的紫色染料​

Clara® Probe 一步法紫色预混液结合了Clara®试剂家族的快速、高灵敏度和高特异性，以及一种用于便于加样观察的惰性紫色染料。该染料大大降低了对探针荧光基团的淬灭作用，确保获得准确的qPCR结果，同时减少了操作和移液误差。

在Clara® Probe 一步法紫色预混液中探针荧光强度的降低程度：

• FAM: 最高25%

• HEX: 最高30%

• Texas Red: 最高25%

• Cy5: 最高10%

  （上述百分比代表紫色预混液与基础预混液相比，在至少两个不同反应中平台期荧光高度的降低。）

​图1. 小鼠RNA的单重检测灵敏度​

使用Clara® Probe 一步法预混液对常见内参基因（β-肌动蛋白和β-2-微球蛋白[B2M]）进行单重检测的扩增曲线。使用5个连续稀释的小鼠总RNA模板（浓度对应50 ng/µL, 5 ng/µL, 500 pg/µL, 50 pg/µL, 和5 pg/µL）。总反应体积为20 µL。循环条件为：52 °C 5分钟，95 °C 3分钟，然后60个循环的95 °C 15秒，60 °C 30秒。即使在低模板浓度下，Clara® Probe 一步法预混液也显示出高灵敏度和可重复的扩增，并具有最大效率。

Singleplex sensitivity with mouse RNA.
Amplification of common house-keeping genes (β-Actin and β-2-Microglobulin [B2M]) in singleplex setup using Clara® Probe 1-Step Mix. Amplification curves are shown in the left panels and efficiency in the right panels. 5 serial dilutions of mouse total RNA template were used, corresponding to 50 ng/µL, 5 ng/µL, 500 pg/µL, 50 pg/µL, and 5 pg/µL. The total reaction volume was 20 µL. Cycle conditions were 52 °C 5 min, 95 °C 3 min and 60 cycles of 95 °C 15 s, 60 °C 30 s. Clara® Probe 1-Step Mix shows high sensitivity and reproducible amplification even at low template concentrations with optimal efficiency.

​图2. 小鼠cDNA的单重检测灵敏度​

使用Clara® Probe 一步法预混液对常见内参基因（β-2-微球蛋白[B2M]）进行单重检测的扩增曲线。使用5个连续稀释的小鼠cDNA模板（浓度对应1 ng/µL, 100 pg/µL, 10 pg/µL, 1 pg/µL, 和0.1 pg/µL [针对B2M]）。总反应体积为20 µL。循环条件为：95 °C 2分钟，然后60个循环的95 °C 10秒，60 °C 30秒。即使在低模板浓度下，Clara® Probe 一步法预混液对DNA靶标也显示出高灵敏度、可重复的扩增以及最佳效率。

Singleplex sensitivity with mouse cDNA.
Amplification of common house-keeping genes (β-2-Microglobulin [B2M]), in singleplex setup using Clara® Probe 1-Step Mix. Amplification curves are shown in the left panels and efficiency in the right panels. 5 serial dilutions of mouse cDNA template were used, corresponding to 1 ng/µL, 100 pg/µL, 10 pg/µL, 1 pg/µL, and 0.1 pg/µL (for B2M). The total reaction volume was 20 µL. Cycle conditions were 95 °C 2 min and 60 cycles of 95 °C 10 s, 60 °C 30 s. Clara® Probe 1-Step Mix shows high sensitivity and reproducible amplification even at low template concentrations with optimal efficiency also for DNA targets.

 ​图3. 多重检测中的可靠性能​

使用Clara® Probe 一步法预混液（粉色条）、Thermo Fisher SuperScript III Platinum OneStep qRT-PCR Kit（绿色条）、Thermo Fisher TaqPath 1-Step Multiplex Mastermix（蓝色条）和NEB Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit（黄色条）对常见冬季病毒（甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和SARS-CoV-2）进行多重检测。使用5个连续稀释的RNA模板（浓度对应每种病毒基因组40,000, 4,000, 400, 40, 和4个拷贝）。总反应体积为20 µL。循环条件为：52 °C 15分钟，95 °C 3分钟，然后50个循环的95 °C 15秒，60 °C 30秒。在多重检测中，即使在低拷贝数模板下，Clara® Probe 一步法预混液也显示出高灵敏度、可重复的扩增以及最佳效率，其表现与主要竞争对手的探针法一步法预混液相当或更优。

​Reliable performance in a multiplex setup.
Multiplex amplification of common winter viruses (Influenza A, Influenza B, Respiratory Syncytial Virus, and SARS-CoV-2) using Clara® Probe 1-Step Mix (pink bars), Thermo Fisher SuperScript III Platinum OneStep qRT-PCR Kit (green bars), Thermo Fisher TaqPath 1-Step Multiplex Mastermix (blue bars) and NEB Luna Universal Probe One-Step RT-qPCT Kit (yellow bars). Ct values are shown in the top panels and efficiency in the bottom panels. 5 serial dilutions of RNA template were used, corresponding to 40 000, 4 000, 400, 40, and 4 copies of each viral genome. The total reaction volume was 20 µL. Cycle conditions were 52 °C 15 min, 95 °C 3 min and 50 cycles of 95 °C 15 s, 60 °C 30 s.
Clara® Probe 1-Step Mix shows high sensitivity and reproducible amplification even at low copy number templates with optimal efficiency in a multiplex setup, in line or better than the major Probe 1-Step mix competitors.

提高实时荧光定量PCR的可靠性​

广泛的优化使该预混液适用于所有核酸靶标类型。我们已针对常见RNA病毒（包括SARS-CoV-2、RSV、甲型和乙型流感病毒）、标准看家基因（如β-肌动蛋白和GAPDH）以及DNA靶标进行了测试。预混液中含有逆转录酶并不影响DNA靶标的直接扩增，这意味着无论您检测DNA序列还是RNA序列，都能获得相同的高效率。该预混液高度稳定，在不同运行批次间表现出很强的重复性，使您的数据具有可重复性，并对得出的实验结论充满信心。

​最大化一步法qPCR的灵敏度​

Clara® Probe 一步法预混液的高浓度4x形式提供了更高的灵敏度和灵活性，允许向每个反应中加入更多样品，并可以放心地使用更小的反应体积。快速扩增允许获得更早的Ct值，并能够可靠地检测到低至每20 μL反应4个靶标拷贝（0.8拷贝/μL）。即使在最稀薄的样品中也能获得卓越的检测性能。