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文献和实验) 抗体结合,形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 唾液酸( SA ) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值),通过标准曲线计算样品中 人 唾液酸(SA ) 浓度。 试剂盒组成 : 试剂盒组成 48 孔配置
REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度,需要摸索,从200nM到700nm等,设置不同浓度。3、每个引物浓度,从well 1到12设置4个样本,阳性cDNA 1和2,NTC以及H2O,做triplicate。4、若用ABI7000或7700,所有的PCR条件可设置成一致的,减少麻烦,当然,引物
Raft culture media (aka Green’s media)
=7500. Dissolve in 1N NaOH to 1mg/ml. Dilute 1000-fold in 0.1N NaOH. Store working aliquots at -20C. Cholera toxin (Sigma), MW=87kD, final concentration=0.1nM, working stock=50m g/ml, Dilution factor=5750.
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