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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 物种来源:
小鼠
- 生长状态:
贴壁生长
- 规格:
1×10⁶cells
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文献和实验RAW264.7因是单核巨噬细胞其生物学特性就是贴壁特别牢,普通的方法根本就不可能将它消化下来,这也是养这种细胞最头痛的问题。现将我的一点心得,简介如下:消化液:0.5%胰酶、0.2%EDTA,实验前加温到37度以50ml培养瓶为例:1、细胞贴壁生长,长满瓶底80%时,弃去培养液,加D-HANKS 漂洗 两次;2、 加入含胰酶和EDTA的消化液1-2ml,消化37℃约2-5min,镜下可见细胞基本圆形回缩即中止消化,弃消化液加D-HANKS 漂洗两次;3、加入新培养液10ml复吹打混悬细胞
MOI 值 50-200,puromycin 常规剂量 1-2 µg/mL;一般不需要加助转剂 polybrene。 ②Jurkat 细胞 Jurkat 细胞是一种常用的人类T细胞白血病细胞系,是一种悬浮细胞。慢病毒感染悬浮细胞步骤可以参考上文。 Jurkat 细胞感染慢病毒的 MOI 以 50-80 为宜,一般不需要加助转剂 polybrene。 图 6:慢病毒感染 Jurkat 细胞 ③RAW264.7 细胞 RAW264.7 中文全名为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞,属贴壁细胞,最好的形态呈现
毒性作用。EST12 蛋白导致小鼠腹腔巨噬细胞(图 1A 和 B)、人单核细胞 THP-1(图 1C)和小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)死亡(图 1D)。结果表明,EST12 对巨噬细胞具有较强的毒性。 图 1 巨噬细胞焦亡诱导蛋白 EST12 的鉴定 A-D:分别用 EST12 和 Rv1577 处理小鼠腹腔巨噬细胞(A、B)、PMA 分化的 THP1 细胞(C)、小鼠骨髓巨噬细胞 BMDMS(D),采用 LDH 释放法分析。E:WB 检测 2μM EST12 或 RV1577 处理巨噬细胞
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