4,5,6,7-TETRAFLUORO-3-METHYL-1

【专题讨论】新手做WB的几张片子，请各位高人指点。

我是一个门外汉，刚刚做WB。做出来后全是模糊的片子，还有就是只有黑点，没有条带。一直没找到原因。恳请各位高人教导。并且按照以下的方法做。我做的是SD大鼠骨骼肌组织的蛋白检测，取300mg肌肉，最终加2.4ML裂解液。10000转离心10分钟。定蛋白也是按一下方法。上样按每10微升80微克蛋白上的样。用的是大连竞迈公司的垂直电泳仪。装模是半干法，按没分钟1KD转的。一抗1：1000.二抗1：6000。。 我测的蛋白在95KD左右，一半装2-2.5小时。但是结果不是背景强就是没东西。而且经常

单组分溶液配制

  filter sterililize; no DEPC treatment. Preparation of dNTP's. The quick protocol for ~100mM stock. dilute all four dNTP's (250mg of each) in 3.676ml of H2 O; + 424µl 5M NaOH; check the pH: ~0.5µl on pH-paper

实时定量PCR的原理、探测化学物质及探针优化(二)

1）为了在SG反应后作溶解曲线，引入与溶解曲线起始温度点相同的保温步骤（大约60秒），这样可以确保溶解温度起始于一个确定的温度。2）溶解曲线分析可以重复。可以在相当一段时间内重新作溶解曲线，甚至到第二天也可以。3）关于可以用SG检测的引物对的列表4） 进行SG分析的典型程序是什么？变性：检查反应所用的酶（2min，5min，10min或15min）循环：95度/20秒，退火温度/20秒，72度/20秒保温：72度/60秒溶解：72-99度，on Melt A5）在哪个通道SG可以被检测？双通道