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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
RT
- 英文名:
N-Methyl(2-methyl-3-furyl)methylamine
- 库存:
99
- 供应商:
上海源叶生物科技有限公司
- CAS号:
916766-85-3
- 规格:
1g
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文献和实验要设立对照。该法可用于多样本、多位点甲基化的检测,样本需要量少,适于临床样本,但存在假阳性问题。 2.2.11 甲基化敏感性斑点分析(methylation sensitive dot blotassay,MS-DBA) G Clément等2005年[43]报道了一种新的方法,能够定量或半定量分析样本中的甲基化水平。这个方法的过程是:先用重亚硫酸盐处理待测DNA片段,随后以非CG区的引物行PCR扩增,将扩增产物变性后转移到尼龙膜上,用3'端DIG标记的含有2个CG(或TG)的双核苷酸探针与DNA
DNA 样品,将未甲基化的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U)。重亚硫酸盐处理不会影响甲基化的胞嘧啶(m5C) 。为了检测甲基化位点,一对引物经设计带有鸟嘌呤(G),可与目标序列中的 m5C 配对;为了检测未甲基化位点,另一对引物带有腺嘌呤(A),可与重亚硫酸盐转化分子中的U配对(随后,与后续 PCR 循环中的胸腺嘧啶(T)配对)。通过引物配对得到的阳性 PCR 扩增结果可用于确定位点的甲基化状态(图 7)。 图 7.甲基化特异性 PCR 第一步,使用重亚硫酸盐处理 DNA 样品,将未甲基化的胞嘧啶转化
blotassay,MS-DBA) G Clément等2005年[43]报道了一种新的方法,能够定量或半定量分析样本中的甲基化水平。这个方法的过程是:先用重亚硫酸盐处理待测DNA片段,随后以非CG区的引物行PCR扩增,将扩增产物变性后转移到尼龙膜上,用3'端DIG标记的含有2个CG(或TG)的双核苷酸探针与DNA杂交,随后用带有荧光标记的抗DIG抗体与之反应。与双CG的探针获得杂交的标本含有甲基化,而与TG探针杂交的标本未被甲基化。通过比较斑点上荧光的强度测定甲基化水平。 这种方法的优点是快速、简便、易于
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