8-溴-3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸;1159

师弟问了我 25 个引物相关的问题

35-mer 寡核苷酸的纯化是充分的。反向树脂化的 HPLC 与阴离子交换树脂的 HPLC 呈现相似的纯化效率。因为 HPLC 的纯化效率很大程度依靠寡核苷酸的长度，用 HPLC 法不能有效纯化长的寡核苷酸（大于 35-mer) 。◆　 PAGE对于长的寡核苷酸的纯化（ 50-100mer ），我们推荐 PAGE 纯化法，它使用交连的聚丙烯酰胺凝胶 ( 电泳 ) 作为纯化基质。尽管 PAGE 显示出高的纯化效率（＞ 98% ），但它在额外的步骤方面有一些缺陷，比如在 PAGE 之后需要提取和脱盐

分子生物学常用实验技术（page 2)

至100-200mg/ml。 3、连接反应后，反应液在0℃储存数天，-80℃储存2 个月，但是在-20℃冰冻保存将会降低转化效率。 4、粘性末端形成的氢键在低温下更加稳定，所以尽管T4 DNA 连接酶的最适反应温度为37℃，在连接粘性末端时，反应温度以10-16℃为好，平齐末端则以15-20℃为好。 5、在连接反应中，如不对载体分子进行去5'磷酸基处理，便用过量的外源DNA 片段（2-5 倍），这将有助于减少载体的自身环化，增加外源DNA 和载体连接的机会。 6、麦康凯选择性琼脂组成

一些分子生物学常用实验技术方法，建议加分啦

过多会使产物非特异性增加,过少则使产量降低.反应结束后,如果需要利用这些产物进行下一步实验,需要预先灭活Taq DNA聚合酶, 灭活Taq DNA聚合酶的方法有：(1) PCR产物经酚:氯仿抽提,乙醇沉淀。 (2) 加入10mmol/L的EDTA螯合Mg2+ 。 (3) 99-100℃加热10min.目前已有直接纯化PCR产物的Kit可用。　　6. 反应缓冲液：反应缓冲液一般含10-50mmol/L Tris·Cl (20℃下pH8.3-8.8), 50mmol/L KCl和适当浓度的Mg