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99
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上海源叶生物科技有限公司
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500ml
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文献和实验g,在2~5℃下解冻,切成小块,用组织捣碎机中绞碎成胰浆,在5~10℃存放24h以上,使胰酶自身活化。胰浆中加入25%(质量分数)乙醇溶液250mL(25%乙醇溶液中加0.015mol/L HCl 、0.05mol/L CaCl 2 ),捣碎机中捣碎1min。胰浆倒入500mL 烧杯 中,间隙搅拌,温度20℃左右,活化5~6h。每隔1.5h,吸取2mL活化液用于测定激活后的蛋白质含量和酶活性。活化反应结束后,胰浆3 500 r/min离心20min,将离
Na2EDTA•2H2O,用NaOH调pH至8.0(约需2 g 左右的固体NaOH),溶解后定容至100 ml。(6)GUS酶提取液:0.1 M 磷酸缓冲液(pH7.0)取50 ml;10% SDS取1 ml; 0.5 M EDTA(pH8.0)取2 ml;Triton X-100取100 ul;β-巯基乙醇100 ul;用水定容至100 ml。(7)MUG底物:称8.8 mg MUG,溶于10 ml GUS酶提取液中,配制成2 mmol/L 的工作浓度。(8)反应终止液(0.2 mol/L Na
烷基硫酸钠(SDS);三羟甲基氨基甲烷(Tris);乙二胺四乙酸(EDTA);饱和酚;氯仿;异戊醇;无水乙醇;75%乙醇;蛋白酶K;RNase酶;手术剪刀、镊子、吸水纸;微量取液器;研钵、1.5mL 离心管、一次性手套、1.5mL离心管架、记号笔…… 试剂配制 1.Tris-HCL 1mol/L PH8.0 50ml 配制方法:40ml双蒸水,6.057g固体Tris放入烧杯中溶解,用浓盐酸调PH值到8.0,转移到50ml容量瓶中,加入双蒸水定容,摇匀后,转到准备好的输液瓶中,贴上标签,高压灭菌后,降至室温
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