PKI-179 hydrochloride;1463510-

人APC和TSC－2 cDNA的长5＇RACE

 图2 APC 5＇末端的扩增。用对应APC mRNA的位置5846的GSP反转录1mg Hela总RNA得到APC mRNA。cDNA被纯化、加尾，和用对应位置1797（A带）和位置1632（B带）的引物和AAP一起，用ELONGASE酶混合物来扩增（94℃ 30s，接着35个循环的94℃ 15 s，55℃ 30 s，68℃ 5 min）。初步PCR用TE缓冲液稀释100倍，取1ml用引物APC－1632（A带）或引物APC－1242（B带）和AUAP分别重新扩增（30个循环），每个PCR

RNA-biotin based pulldown assays for the detection of siRNA targeted genomic regions and siRNA directed histone modifications (PROT32)

H20 ChIP elution buffer       20ml final volume:       500µl 2M Tris       2ml 10% SDS       400µl 0.5M EDTA       17.1ml H2O cold lysis buffer       1mM PMSF       20units RNasin       10mM Tris-HCl pH 7.4       10mM NaCl       3mM MgCl2      

In Situ HYBRIDIZATION TO TISSUE SECTIONS

1.0ml 10mM rGTP 1.0ml 0.5mM rUTP 1.0ml 0.75M DTT 1.0ml RNase-Block (25U/ml) 2.5ml 35S-rUTP (100mCi) 1.0ml T3 or T7 polymerase (10U) Vortex, spin down and incubate 1-2h @ 30 degrees C. Incorporation should be 70-90%. Determine