二苯基硼酸-2-氨基乙酯;524-95-8;10mM in

【原创】表达蛋白的分离与纯化

8.0）,2mM EDTA,100 mM NaCl,3% Triton X-100 。 5．缓冲液Ⅲ：50mM Tris-HCl（pH8.0）,2mM EDTA,100 mM NaCl,0.5%Triton X-100,2M 盐酸胍。 6.．缓冲液C：8M脲素，10mMβ-巯基乙醇，100 mM Tris-HCl（pH8.0），2mM EDTA及脱氧胆酸钠。 （二）操作步骤 1． 用缓冲液A漂洗菌体细胞（10ml/g）, 离心6000g×15min，收集菌体细胞，重复此步骤，将菌体细胞再在缓冲液A中

体外DNA重组技术

细胞内，被处理后易于接纳DNA分子的细胞称作感受态细胞。下面介绍感受态细胞的制备。 【实验试剂与器材】 大肠杆菌菌株，LB培养基，100mM CaCl2 ，DMSO或2-巯基乙醇，离心机，振荡器，冰浴 【实验方法与步骤】 （一）感受态细胞的制备 1. 将大肠杆菌菌株在LB琼脂培养基上画线，37℃培养12～16h； 2.次日从琼脂平板上取一单菌落于2ml LB培养基中，37℃以200 rpm速度振荡培养12～16h； 3.取1ml上述培养物接种于100ml LB培养基中，37℃

多肽固相合成法

的缩合剂如DCC或羧基二咪唑，使被保护氨基酸与树脂形成共酯以完成氨基酸的固定；氨基树脂或酰肼型树脂，却是加入适当的缩合剂如DCC后，通过保护氨基酸与树脂之间形成的酰胺键来完成氨基酸的固定。氨基、羧基、侧链的保护及脱除 要成功合成具有特定的氨基酸顺序的多肽，需要对暂不参与形成酰胺键的氨基和羧基加以保护，同时对氨基酸侧链上的活性基因也要保护，反应完成后再将保护基因除去。同液相合成一样，固相合成中多采用烷氧羰基类型作为α氨基的保护基，因为这样不易发生消旋。最早是用苄氧羰基，由于它需要较强的酸解条件