3,4-丙烯二氧基噻吩-2,5-二羧酸;177364-98-

PCR-SSCP 技术实验

引物 各 1 ml ddH2O 加至终体积 20 ml PCR反应循环参数： 95℃ 5 min； 94℃ 30 s、62℃ 50 s、72℃ 90 s，共30个循环； 72℃ 7 min。 反应结束后，置4℃保存。 二、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 1．制备6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶：30%聚丙烯酰胺（交联度49:1）10 ml，5×TBE缓冲液10 ml，加蒸馏水至50 ml，加TEMED 25 ml、10%过硫酸铵250 ml，混匀后灌胶，插入加样梳子。待胶

PCR-SSCP技术

20 mlPCR反应循环参数：95℃ 5 min； 94℃ 30 s、62℃ 50 s、72℃ 90 s，共30个循环； 72℃ 7 min。反应结束后，置4℃保存。二、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳1、制备6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶：30%聚丙烯酰胺（交联度49:1）10 ml，5×TBE缓冲液10 ml，加蒸馏水至50 ml，加TEMED 25 ml、10%过硫酸铵250 ml，混匀后灌胶，插入加样梳子。待胶完全聚合后，拔出加样梳子，安装电泳装置，加入电泳缓冲液（1×TBE），缓冲

最全面的MTT大汇总

加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况3.5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。4.每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。5.终止培养，小心吸去孔内培养液。6.每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联