PPP1R2C基因敲除HEK293T细胞RIPA裂解液;K3

Western 实验步骤

样本准备 蛋白提取 所需仪器：匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF（蛋白酶抑制剂）、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子，消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液：PMSF=100：1。 1） 组织处理：首先用酒精棉消毒剪刀和镊子，取适量的组织于匀浆器中，用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。（含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆） 2） 细胞处理： A、 贴壁细胞处理：去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解液

Caspase活性检测系列（分光光度法）检测原理及操作指南

酶活性检测： A、取Ac-特异性多肽-pNA和2 ×反应液，溶解后冰浴备用。 B、 2 ×反应液工作液制备：每50 μL 2 ×反应液加入0.5 μL DTT。 C、吸取45 μL含100-200 μg蛋白的细胞或者组织裂解上清，如体积不足45 μL则用裂解液工作液补足至45 μL（各组采用相同的蛋白含量和体系进行测定和比较）。 D、按照下表设置反应体系： 注意： 1） 在设置反应体系时先加入反应工作液，再加入待测样本后适当混匀，注意避免产生气泡。 2） 最后加入Ac-特异性多肽-pNA

交联染色质免疫共沉淀（X-ChIP）实验设计

冻存于-20°C.样品采用蛋白酶K处理可使相邻肽段剪切成羧基团的芳香族氨基酸和脂肪族氨基酸。蛋白质和DNA之间的交联通过DNA的纯化被打断。3检测DNA浓度，取5ul纯化的DNA到995ulTE中得到一个原溶液的200倍稀释测其OD260。那么DNA的浓度就为OD260x10,000.μg/ml。这样就可计算出染色质制品的DNA浓度。4 免疫共沉淀1 从2.2得来的染色质制品，推荐每个IP样品都采用25ug的DNA的量。每个样品按1：10的量加入RIPA溶液。需要一个样本作为空珠子的对照。2在除空