Elabela/Toddler-32;0;K21165-50

Stripping Western Blots

antibody. The amount will depend on the antibody and the abundance (total and relative) of the antigen, but a good starting point is 0.5μg antibody / 500μg lysate. 8) Incubate for 1-2hr at 4OC with rocking. Avoid overnight incubationsa. 9) Add 30-40μl

Raf 蛋白 Ras 结合结构域的简并进化库合成以及利用片段互补法快速筛选二氢叶酸还原酶的快速折叠且稳定的克隆

固体培养基。 ( 9 ) 每文库 100〜250 ml LB 培养基。LB 培养基中添加 0.2% 葡萄糖、0.25 倍的 M9 盐溶液、10 μg/ml 四环素、10 μg/ml 壮观霉素和 10 μg/ml 氨苄青霉素。 ( 10 ) Plasmid Midi Kit (12143)  (Qiagen)。 2.3 文库的筛选 ( 1 ) BL21 电转感受态细胞，先转化质粒 pREP4，再转化 pQE32△F（F [ 3 ] 代表 DHFR 片段

利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化

化镁和 0.1% 的吐温-20；或者 100 mmol/L Tris 氯化氢（25°C 时 pH 9.0 )，500 mmol/L 氯化钠，15 mmol/L 氯化镁和 1% 的 Triton X-100。 ( 4 ) 混合 dATP、dTTP、dGTP、dCTP 和 dUTP 的 dNTP 储液（10 mmol/L 或 100 mmol/L；不同厂家）。 ( 5 ) 灭菌去离子水。 ( 6 ) 10X Tris-硼酸-EDTA 缓冲液（TBE 缓冲液）：包含 1 mol/L Tris、0.83