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- 文献和实验
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上海源叶生物科技有限公司
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10T
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文献和实验BCA 蛋白定量法是实验室常用的蛋白质定量方法。Invent 所有蛋白提取试剂盒提取的蛋白均可使用 BCA 法进行定量!那么今天小编就手把手的教大家该如何用 BCA 来定量!BCA 法原理碱性条件下,蛋白将 Cu2+还原为 Cu+,Cu+与 BCA 试剂相互作用形成紫色的络合物,该水溶性的复合物在 562nm 处显示强烈的吸光性,吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系,因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。实验操作具体步骤1. 梯度稀释牛血清白蛋白(BSA)标准品(具体操作按试剂盒中说明
下厌氧培养 24 h。3. DNA 模板制备及浓度测定 取1.4 ml TPGY 培养物转移到 1.5 ml 离心管中,14000 r/min 离心 2 min,弃去上清液。沉淀使用商品化细菌基因组 DNA 提取试剂盒提取 DNA,按照试剂盒说明书进行操作。提取的 DNA 进行纯度和浓度测定后置于 -20 ℃ 保存。4. PCR 扩增 采用分别针对 A、B、E、F 型肉毒梭菌肉毒毒素基因设计的型特异性引物(见附表1),进行多个 PCR 扩增,每个 PCR 反应管检测一种类型的肉毒
,我专门购买了大肠杆菌基因组提取试剂盒,花了500个银子,实际上根本不必买,在取目的基因时只要用适量的菌液就好。(当然,因实验而异,对基因组纯度要求高的实验还是需要提取试剂盒) 4:回收高保真酶扩增的PCR产物,NdeⅠ,SalⅠ双酶切,上同样用NdeⅠ,SalⅠ双酶切的PET28载体(需要SAP处理),转化BL21(DE3)表达菌株。由于刚刚购买的NdeⅠ,SalⅠ活性很低,因此在表达载体构建时消耗了大量时间,当确认感受态和转化方法没有问题,转化结果表现为:(1)表达载体没有经过SAP处理时,平板
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