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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
2-8℃
- 库存:
99
- 供应商:
上海源叶生物科技有限公司
- 规格:
500ml
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文献和实验】1. 消化缓冲液:100 mM NaCl,10 mM Tris.Cl (pH8.0) 25 mM EDTA (pH8.0),0.5% (w/v) SDS,0.1 mg/mL 蛋白酶 K。2. 7.5mol/L 乙酸铵。3. 100% 乙醇。4. 酚/氯仿/异戊醇。【实验方法与步骤】1. 将新鲜组织剪成小块并立即置于液氮中冻存;2. 将 200 mg~1 g 的组织用预冷的研钵研碎,或用锤子将其捣为细粉末,每 100 mg 组织用 1.2 mL 消化缓冲液悬浮,然后于 50℃ 摇荡温育 12~18 h
离心机2.试剂( 1 ) 2%琼脂2g 琼脂加电极缓冲液100ml,水浴中溶化。( 2)电极缓冲液Tris 6g ,Gly28.8g ,SDS 2g ,去离子水溶解后,用HCl调pH值至8.3,水定容至2000ml 。( 3 ) 30% Aer Acr 30g,水溶后定容至100ml,过滤,冰箱中贮存备用。( 4 ) 1% Bis Bis 1g ,水溶后定容至100ml,过滤,冰箱中贮存。( 5)分离胶缓冲液(1.5mol/L Tris,pH8.7)Ths 15.17g,适量水溶解,然后用lmol/L
r/min)20rain,除去其中少量的沉淀物,装入透析袋中,再置于烧杯中,用pH8.0缓冲盐水透析(0~4~C)过夜。⑤过柱 取透析过夜的标记物,通过葡聚糖凝胶SephadexG-25或G—50柱,分离游离荧光素,收集标记的荧光抗体进行鉴定。洗脱液:0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2);过滤量:12ml标记全球蛋白液(过滤前未透析);收集量:20ml(稀释1.7倍左右)。2.Chadwick法(1)试剂和材料 抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%碳酸钠水溶液、0.01mol/L
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