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一管化反转录试剂(含双链DNA消化内切酶)

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  • BIOGOETHE/博格德生物
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  • 2026年03月18日
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      广州市左克生物

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      100rxns

    一管化反转录试剂(含双链DNA消化内切酶)

    产品货号:BGD1002

    产品规格:100rxns

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    产品详情

    All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)是一款高效、便捷、减少污染的高质量一链cDNA合成试剂盒,包含M-MLV GIII Reverse Transcriptase及其反应Buffer、RNA酶抑制剂、dNTPs, Oligo(dT)₂₀VN和随机引物等一链cDNA合成所需的所有组分,仅需加入RNA模板和水即可开始反应。使用该逆转录试剂盒获得的cDNA,下游可用于qPCR、普通PCR等实验。

      RNA中存在基因组DNA污染,如果反转录前不做去除处理,下游进行qPCR反应时基因组DNA与cDNA会同时进行扩增,尤其是引物设计在同一外显子上时。本试剂盒采用dsDNase高效去除基因组DNA污染,区别于常规的DNase I,dsDNase能够特异性的消化双链DNA(dsDNA以及DNA与RNA的杂合链),并且具有热敏感性,可在高温条件下快速不可逆地失活。与传统使用DNase I去除基因组DNA污染的方法相比,dsDNase无需额外加入EDTA进行失活,不仅节省实验时间,而且降低了对逆转录反应的抑制。All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)作为升级后的一链cDNA合成试剂盒,15分钟内最长可获得12 kb cDNA。

           可依据基因组污染严重程度选择采用去基因组DNA污染与反转录分开进行的操作方法,或者去基因组污染与反转录一步法进行的操作方法。

    储存方法:-20℃保存

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    • 限制性内切酶对DNA消化的一般方案

      ,一般为37℃水浴消化1hr。 3. 用于回收酶切片段时,反应总体积可达50-200μl,各反应组分需相应增加。 4. 多种酶消化时若缓冲液条件相同,可同时加入;否则,先做低温或低盐的酶消化,再做高温或高盐的酶消化。 5. 酶切结束时,加入0.5M EDTA(pH 8.0)使终浓度达10mM,以终止反应。或将反应管在65℃水浴放置10min以灭活限制性内切酶活性。 6. 如消化反应体积过大,电泳时加样孔盛不下,可加以浓缩:终止反应后,加入0.6体积的5M乙酸铵(或1/10

    • DNA限制性内切酶消化

      [原理]DNA 限制性内切酶消化是基因分析中的关键步骤。内切酶是最关键的工具酶。限制性内切酶是一类具有严格识别位点,并在识别位点内或附近切割双链DNA 的脱氧核糖核酸酶。酶单位规定为:在最适反应条件下 1 小时完全消化 lμg λDNA 的酶量为 1 个单位。需注意酶单位数是以切割线性DNA 为标准定出的。消化其它种DNA 则应根据DNA 分子大小、形状适当增加或减少所需的酶量,影响限制性内切酶活性的因素包括DNA 的纯度、缓冲液、温度及酶本身。不同的限制性内切酶对缓冲液中盐浓度的要求各不相同

    • DNA分子的限制性内切酶消化

      EDTA(pH 8.0)使终浓度达10mM,以终止反应。或将反应管在65℃水浴放置10min以灭活限制性内切酶活性。 6. 如消化反应体积过大,电泳时加样孔盛不下,可加以浓缩:终止反应后,加入0.6体积的5M乙酸铵(或1/10体积3M NaAc)和2倍体积无水乙醇,在冰上放置5min,然后于4℃离心12000g× 5min。倾去大部分蛋白质的上清液。于室温晾干DNA沉淀后溶于适量TE中(pH 7.6)。 7.如要纯化消化后的DNA,可用等体积酚/氯仿(1∶1)和氯仿各抽提一次,再用乙醇

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