磁珠法质粒小提试剂盒

产品原理

本试剂盒用于质粒DNA的小量制备与纯化。菌体经碱裂解、高盐、低pH处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被磁珠吸附。通过漂洗液（Buffer PW）的清洗可去除杂质，在低盐、高pH条件下洗脱，最后得到纯度较高的质粒DNA。

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产品信息

注意：

1. 使用前将全部RNase A溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8 ℃保存。

2. 使用前按试剂瓶标签上的要求，在漂洗液Buffer PW中加入无水乙醇。

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产品描述

磁珠法质粒小提试剂盒是一种基于磁性分离技术的高效、快速质粒DNA提取工具，适用于从大肠杆菌等细菌中快速纯化高纯度质粒DNA。本试剂盒采用独特的磁珠吸附原理，无需离心或柱式过滤，操作简便，可在30分钟内完成质粒提取，特别适合高通量样本处理。

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产品特点

快速高效：无需离心，结合磁珠吸附技术，操作简便，可在30分钟内完成提取。

高纯度质粒：沉淀致密，优化的缓冲体系有效去除杂质，所得质粒可直接用于低敏感细胞株的转染和各种常规分子生物学实验。

高通量兼容：适用于手动操作或自动化工作站，兼容96孔板，满足大规模样本需求。

安全环保：避免苯 酚/氯仿等有毒试剂，实验过程更安全。

稳定可靠：磁珠重复性好，批次间稳定性高，回收率可达90%以上。

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储存条件及有效期

详情见产品内包装标签。

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使用说明

1、注意事项

1）细菌培养时间一般为12 ~ 16小时，如接种量大则应减少培养时间，过度培养会降低质粒质量甚至导致质粒DNA突变。

2）注意Buffer P1，Buffer P2和Buffer P3的用量比例，若细菌量增大，需按比例放大这些溶液的使用量。

3）随菌体增多应延长Buffer P2的作用时间，直至溶液成粘稠透明状，但时间过长会导致质粒DNA变性。

4）质粒的具体产量跟菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关，一般1.5 mL过夜培养菌体可收获约10 µg高拷贝质粒。

5）纯化的质粒在电泳中表现为2 ~ 3 条带有时甚至为4 ~ 6条带均属正常。

2、操作步骤

1. 取1 ~ 5 mL过夜培养的菌液，室温12,000 rpm离心1分钟，尽量将上清去除干净。
2. （注意：根据菌液浓度选择合适的取液量，收集的菌体量以能够充分裂解为佳。）
3. 加入250 μL Buffer P1，用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。
4. （注意：如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低。）
5. 加入250 μL Buffer P2，温和颠倒混匀6 ~ 8次。
6. （注意：此过程不可剧烈震荡，以免造成基因组DNA片段的污染，所用时间不要超过5分钟，以免质粒受到破坏。）
7. 加入350 μL Buffer P3，立即温和颠倒混匀6 ~ 8次，可见白色沉淀物产生，室温静置2 分钟，然后12,000 rpm离心10 分钟。
8. （注意：Buffer P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀，离心后如果上清中还有微小白色沉淀，可将上清倒入另一只离心管后再次离心取上清。）
9. 将上清液转移到一只新的离心管中，吹打混匀MagBind™ Plasmid Beads，向其中加入20 μL MagBind™ Plasmid Beads，吹打混匀后，室温静置2分钟，让质粒DNA与MagBind™ Plasmid Beads充分结合。
10. 将离心管置于磁力架上，室温静置1分钟，弃上清。
11. 加入500 μL的Buffer PW，室温静置1 分钟，弃上清。
12. （注意：漂洗液Buffer PW在使用前按试剂瓶标签上的要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防乙醇挥发。）
13. 重复:“步骤7“一次。
14. 室温静置2 ~ 5分钟，至乙醇彻底风干。
15. （注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响质粒的后续使用。）
16. 加入50 μL的Buffer EB，室温放置2 分钟。
17. 将离心管置于磁力架上，室温静置1 分钟，取上清于另一个新的离心管中，质粒制备完毕。
18. （注意：为增加洗脱效率，可将Buffer EB在50 ~ 60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0 ~ 8.5之间，为了增加质粒回收率，可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置1 分钟，再次离心收集。）

3、低拷贝或大质粒（ >10 kb）提取

如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5 ~ 10 mL过夜培养物，同时按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液EB应在65 ~ 70℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。

 

订购须知: 

1）所有产品仅可用于科研目的的生物学实验（forresearchuseonly），严禁用于人体或动物的医疗目的