概述
RiboShield® RNase 抑制剂是一种重组蛋白，可抑制多种核糖核酸酶（RNase）的活性，从而可靠保护样本免受 RNase 降解。
该 RNase 抑制剂专为对 RNA 敏感的实验设计，如逆转录 - 实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、互补脱氧核糖核酸（cDNA）合成和 RNA 测序。在这些实验中，即使微量 RNase 的存在，也会严重影响 RNA 质量和实验结果。
核糖核酸酶（RNase）存在于所有细胞类型和生物体内，其广泛存在的特性在实验室中可能造成严重问题。RNA 样本中即使污染微量 RNase，也足以导致 RNA 完全降解。RiboShield® RNase 抑制剂是一种重组人胎盘蛋白，可抑制多种核糖核酸酶（包括 RNase A、B 和 C）的活性，从而可靠保护 RNA 免受 RNase 降解。
- 提供卓越保护，提升对 RNA 敏感实验的性能
- 特别适合加入基于唾液的病毒（SARS-CoV-2）检测试剂中
- 与逆转录酶、RNA 聚合酶和 Taq DNA 聚合酶兼容
- 在储存过程中保护 RNA 样本
- 抑制真核生物 RNase，包括 RNase A、B 和 C
- 在 65°C 条件下可稳定至少 30 分钟
- 无核糖核酸酶和磷酸酶污染
- cDNA 合成
- 一步法 RT-PCR
- 一步法 RT-qPCR
- RNA 纯化
- RNA 测序
- 体外转录与翻译
将 10 种不同稀释度的 RiboShield RNase 抑制剂，与三种竞品抑制剂分别在含 5ng RNase A 和 2μg RNA 的 5×UltraScript 缓冲液中，于 37°C 孵育 30 分钟。孵育后，使用 UltraScript 逆转录酶和寡聚脱氧胸苷（oligo (dT)）引物对 RNA 样本进行逆转录，再使用 qPCRBIO SyGreen Blue Mix No-ROX 试剂对肌动蛋白（g-Actin）基因进行扩增。
所用 RNase 抑制剂包括 PCR Biosystems 公司的 RiboShield、Promega 公司的 RNasin、Bioline 公司的 RiboSafe 和赛默飞世尔（ThermoFisher）公司的 RNaseOUT。每个反应板均设置内参，将循环阈值（Ct 值）转换为 RNA 微克数（μg），实验重复 4 次（n=4）。
数据以 “每浓度 RNase 抑制剂对应的可逆转录 RNA 量” 为指标，分别以线性坐标（a）和对数坐标（b）绘制。计算每种抑制剂的半数抑制浓度（IC50），结果显示 RiboShield 的 IC50 值最低，在所有测试抑制剂中对 RNA 的保护效果最佳。
Superior Protection Against RNase A in RT-qPCR: 10 different dilutions of RiboShield RNase Inhibitor and each of three competitor products were incubated with 5ng RNase A and 2μg RNA in 5x UltraScript buffer at 37°C for 30 min. After this step, RNA samples were reverse transcribed using UltraScript Reverse Transcriptase with oligo(dT) primers. Amplification of g-Actin was performed using qPCRBIO SyGreen Blue Mix No-ROX. The RNase inhibitors used were PCR Biosystems’ RiboShield, Promega’s RNasin, Bioline’s RiboSafe and ThermoFisher’s RNaseOUT. Internal standards on each plate were used to convert Ct values into μg RNA. n=4. Data are plotted as amount of reverse transcribable RNA per concentration of RNase inhibitor used, in a linear (a) and logarithmic (b) scale. IC50 values were calculated for each of the RNase inhibitors used. RiboShield has the lowest IC50 value and offers the greatest RNA protection amongst the inhibitors tested.
高温稳定性：将 RiboShield RNase 抑制剂在指定温度下孵育 30 分钟，随后取 40 单位（U）抑制剂加入含 1μg RNA 和 5pg RNase A 的 5×UltraScript 缓冲液中，于 37°C 孵育 30 分钟，最后将样本上样至 1% 琼脂糖凝胶进行电泳。结果显示，RiboShield RNase 抑制剂在高达 65°C 的条件下，仍可抑制 RNase A 活性至少 30 分钟。
RiboShield® RNase 抑制剂专为对 RNA 敏感的实验设计，包括 RNA 提取、RT-qPCR、cDNA 合成和 RNA 测序，可保护 RNA 免受降解，进而提高产物得率和实验性能。
该抑制剂以 1:1 的比例与 RNase 非共价结合，且结合动力学速率快，能确保立即保护 RNA。经 RT-qPCR 实验验证，与主流竞品相比，RiboShield 对 RNA 的保护效果最佳
RiboShield® RNase 抑制剂可在广泛的反应条件下发挥作用，在高达 65°C 的温度下，仍能抑制 RNase A 活性至少 30 分钟（见图 2）。此外，RiboShield 不含半胱氨酸残基 —— 该残基被证实与人类胎盘来源 RNase 抑制剂的氧化敏感性相关 [1]。这一特性使 RiboShield 不仅具有热稳定性，还能更强抵御氧化应激。
该抑制剂可抑制多种核糖核酸酶的活性，包括中性型真核生物 RNase（RNase A、B 和 C），但不抑制 RNase T1、T2、U1、U2、CL3、RNase I 和 RNase H。同时，它不会影响逆转录酶、RNA 聚合酶或 Taq DNA 聚合酶等其他酶的活性，因此可兼容多种涉及 RNA 的酶促反应。
RiboShield® RNase 抑制剂的分子量为 50 千道尔顿（kDa），通过在 High Five 昆虫细胞中表达修饰后的人胎盘基因进行纯化获得。该抑制剂以 1:1 的比例与 RNase 非共价结合，结合 RNase A 的抑制常数（Ki 值）约为 10–14 M [1]。此外，其与 RNase 的快速结合动力学可确保立即保护 RNA。
将 RiboShield RNase 抑制剂与三种竞品抑制剂（各 40 单位），分别在含指定浓度 RNase A 和 1μg RNA 的 5×UltraScript 缓冲液中，于 37°C 孵育 30 分钟，随后将样本上样至 1% 琼脂糖凝胶进行电泳。
图注：L 为 Ambion RNA Millennium 分子量标准（Markers）；所用 RNase 抑制剂包括 PCR Biosystems 公司的 RiboShield、Promega 公司的 RNasin、Bioline 公司的 RiboSafe 和赛默飞世尔（ThermoFisher）公司的 RNaseOUT。结果显示，在所有测试抑制剂中，RiboShield 对 RNA 的保护效果最佳。 风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验
技术资料