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999
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鹿森生物
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1MG

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文献和实验。 ⑵ 取Na125 I 5μl(含2mci~3mci)。 ⑶ 将1mg氯胺T溶于0.5Mol/L pH7.5PB液 0.1ml中。 ⑷ 再将Na125 I和氯胺T分别缓缓加入蛋白质液中,于冰浴中边加边搅拌,加完后再搅拌5min。 ⑸ 加0.1ml(含3mg)偏重硫酸钠(以PB液配制)。 ⑹ 再加1%碘化钾液1滴,看液体是否完全透明。如仍呈棕色,应继续加少许的偏重硫酸钠。 ⑺ 过SephadexG50柱,取第一峰,即为碘标记的蛋白
对某些标本用0.5%Tween-20代替0.5%CHAPS获得更好的效果[2]。 2.3 TRAP扩增 50μlTRAP体系包含20mM tris-HCI(pH8.3),1.5mM MgCI,63mM, KCI, 0.005%Tween-20,1mM EGTA, 50μMdNTP,0.1μg tS,1μg T4基因32蛋白,0.1mg/ml牛血清白蛋白,1~2μlCHAPS细胞提取液(含6μg)蛋白,0.2~0.4μl[α-32
[2]。 2.3 TRAP扩增 50μlTRAP体系包含20mM tris-HCI(pH8.3),1.5mM MgCI,63mM, KCI, 0.005%Tween-20,1mM EGTA, 50μMdNTP,0.1μg tS,1μg T4基因32蛋白,0.1mg/ml牛血清白蛋白,1~2μlCHAPS细胞提取液(含6μg)蛋白,0.2~0.4μl[α-32P]dGIP或[α-32P]dGIP(10μCi/μl, 3000Ci/mmol),这一反应体系可同时满足端粒酶Tap聚合酶的活性需要,23℃10
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