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见标签
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999
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鹿森生物
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5MG

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文献和实验DNaseI Footprintint Solutions 10X Binding Buffer 200 mM Tris 8.0 200 m l 1M Tris pH 8.0 500 mM NaCl 100 m l 5M NaCl 10 mM EDTA 20 m l 0.5 M EDTA pH 8.0 680 m l Q store at room temperature DNaseI Dilution Buffer (this buffer provides the Mg
-1640培养液,继续培养过夜(或12-18h); (3) 轻轻吹起并收集未粘附的细胞,与2%-5% SRBC混匀,使T细胞与SRBC结合形成E-花环,再通过Percoll 3000r/min离心20min,收集次低密度层细胞 (4) 用无Ca2+ 、Mg2+ Hank’s液洗细胞,再用10% FCS的RPMI-1640培养液调整细胞浓度至107 /ml,并将细胞悬液加至预先包被有抗人IgG的24孔培养板中,37℃ 1h进行亲和吸附(Panning
纯化蛋白与粗制核抽提液应保存在-80℃、探针应保存在-20℃以防止降解。 无论探针或是结合蛋白都应避免多次冻融。 4、Poly(dI:dC),非特异性竞争DNA,特异性竞争DNA在EMSA测定中的作用? Poly(dI:dC)由肌苷和胞嘧啶组成。在EMSA反应中加入poly(dI:dC),可抑制粗制核抽提液中转录调节因子与标记探针的非特异结合。结合溶液中的poly(dI:dC)的用量需在正式实验前进行优化,一般用量大约在0.05mg/ml左右。当用纯化的蛋白作凝胶迁移反应时,不必一定
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