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RT
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见标签
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999
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联硕生物
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100mg

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文献和实验实验采用10只2-3周龄SD大鼠,雌雄均可,体重40~60 g。 1.2 试剂 纤连蛋白(fibronectin),Ⅳ型胶原,鼠尾胶,葡聚糖(dextran,分子量100~200kDa),DNA酶Ⅰ(DNaseⅠ)购自Sigma公司;D-Hanks液,PBS,10×PBS按配方自制;Ⅱ型胶原酶购自Worthington公司;明胶,牛血清白蛋白(BSA),HEPES购自Amresco公司;Percoll购自Amersham Biosciences;DMEM(高糖)购自Gibco BRL公司;肝素
min。②荧光素的准备 根据欲标记的蛋白质总量,按每毫克免疫球蛋白加0.01mg荧光色素,用分析天平准确称取所需的异硫氰酸荧光素粉末。也可用下述公式计算出免疫球蛋白、荧光素的量,还可以算出需加缓冲液的量。a.蛋白溶液:含量Amg/m1;容积Bml。b.总蛋白量(AXB)=Crag。c.C/20~C/10=Dmg(如蛋白含量低于20mg/ml,用C/10;如高于20mg/ml,用C/20)。d.荧光素FITC的量:(1/50~2/100)XC=Emg。e.巳0.5mol/L(pH9.5)碳酸盐缓冲
加入5 ml 提取缓冲液,混合后,65 ℃水浴10min ,离心,取上清,合入上述上清液;重复一次;加入等体积的氯仿混合,5 000 r・min - 1离心20 min ,取上清;加入0.6 倍体积的异丙醇,室温沉淀1 h ;20~25 ℃,12 000 r・min - 1离心20 min ,TE 溶解沉淀. SDS-酚氯仿抽提法(方案3) 具体步骤:称取1g土壤样品,加入1ml 0.1mol/l PH8.0 磷酸缓冲液,玻璃珠振荡1min。溶菌酶5mg,使终浓度为2.5mg/ml,室温振荡15
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