(-)-α-侧柏酮,546-80-5，89231-1ML

分子实验方法5:重组质粒的连接、转化及筛选

DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。通过调整连接反应中外源DNA片段和载体DNA的浓度比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。 　　外源DNA片段和质粒载体的连接反应策略有以下几种： 　　1、带有非互补突出端的片段 用两种不同的限制性内切酶进行消化可以产生带有非互补的粘性末端,这也是最容易克隆的DNA

细胞培养面面观

1、首先说清洗：对于玻璃器皿（如移液管、盖玻片之类）可先用酸液浸泡24h以上，再用清水浸泡24h。之后用清水将移液管冲洗10遍，除去残留酸液，再用双蒸水冲洗3-5遍，彻底洗净后放入不锈钢筒中，双层牛皮纸扎口，高压灭菌20min，烘干待用。我们实验室的酸液一般是次强酸液（重铬酸钾120g 浓硫酸200 mL 蒸馏水1 000 mL）配液时要小心烫伤。装培养基的瓶子则要在每次用完培养基以后就要立即洗净，临用时再次用清水冲洗3-5遍，再用双蒸水漂洗3次，洗净后瓶口盖上锡箔纸，外包双层牛皮纸扎口

分子生物学常用实验技术（page 2)

酶抑制剂25UM-MLV(H- )反转录酶200UH2 O 调至总体积25μl 　　(2) 用手指轻弹管壁,吸取5μl 至另一eppendorf 管，加入2-5μCi [α-32 P] dCTP (>400Ci/mmol), 用以第一链同位素掺入放射性活性测定。 　　(3) 37℃(随机引物)或42℃(其它引物)温浴1 小时 　　(4) 取出置于冰上 　　(5) 掺入测定的eppendorf 管加入95μl 50mM EDTA 终止反应,并使总体积为100μl。可取90μl 进行