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999
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联硕生物
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10G

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文献和实验=8.0)和 300 uL 氯仿,颠倒混匀,静置 5 min,14 000×g 离心 10 min。(3)取上清至新 Ep 管中,加入 270 ul 苯酚和 270 ul 氯仿混匀,静置 5 min,14 000×g 离心 10 min。(4)取上清至 EP 管中,加入 270 ul 苯酚和 350 ul 氯仿,轻混,静置 5 min,14 000×g 离心 10 min。(5)取上清至新的 EP 管,加入 500 ul 苯酚,静置 5 min,14 000×g 离心 10 min。(6)去上清液(约 400
CTAB 法 ①取0. 2g 各中药材样品分别用液氮( Ⅰ) 、玻璃砂( Ⅱ) 、氧化铝( Ⅲ) 研磨。②加入56 ℃ 10 倍预热的缓冲液C 于56 ℃温育30 min , 离心, 取上清液加入等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提(室温, 不能低于15 ℃, 否则CTAB 会沉淀) , 10 000g 离心15 min。③取上清液加入1/ 10 倍体积缓冲液D , 于室温下放置15 min , 再用等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提1 次。④上清液加入缓冲液C 于室温下放置6h
温度一般是较低 Tm 值减去 5~10 度。 c.3‘ 端要求:3’ 端必须与模板严格互补,不能进行任何修饰,也不能有形成任何二级结构的可能。末位碱基是 A 时错配的引发效率最低,G、C 居中间,因此引物的 3’ 端最好选用 A、G、C 而尽可能避免连续出现两个以上的 T。 d.引物自身二级结构:引物自身不应存在互补序列,否则会自身折叠成发夹状结构或引物自身复性。 e.引物之间的二级结构:两引物之间不应有多于 4 个连续碱基互补,3’ 端不应超过 2 个。 f.同源序列:引物与非特异扩增序列的同源性应小于
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