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999
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鹿森生物
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10MG

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文献和实验Purification of Myosin Light Chain Kinase
NaCl- 17.55g (Conductivity adjusted to 15m MHO) 0.5 mM EDTA- 2.5ml of 0.2M stock solution 1 mM DTT* - 1ml of 1M stock solution 0.1 mM PMSF* - 1.75ml of 10mg/ml stock solution 7.Buffer F CalM-Seph Equil.10 mM MOPS- 5ml of 2M stock solution 1 liter
一、荧光素与抗体结合1、透析法(1)概述:适用于蛋白质含量低、样品体积小的抗体溶液的标记。标记较均匀,非特异荧光较低。(2)步骤:将含10mg/ml的Ig溶液10ml装入透析袋,将上述透析袋放入烧杯中,含0.1mg/ml FITC的pH9.4的碳酸盐缓冲液100ml;4℃磁力搅拌24h,取出透析袋,进行纯化、鉴定。2、搅拌法(1)概述:适用于蛋白质含量较高、样品体积较大的抗体溶液的标记。标记时间短、效率较高,荧光素用量节省,影响因素多,非特异荧光较强。(2)步骤:将含40mg/mlBP溶液
液D/10=Fml。 f. PBS量D-(B+F)=Gml。注:A为蛋白含量,mg/ml;B为蛋白质溶液的容积;C为蛋白总量,mg;D为常数,mg;正为荧光素的量,mg;F为碳酸盐缓冲液的容积,ml;G为PBS的容积,ml。③结合(或标记) 边搅拌边将称取的荧光色素渐渐加入球蛋白溶液中,避免将荧光素粘于烧瓶壁(大约在5—10min内加完),加完后,继续避光搅拌12h左右。结合期间应保持蛋白溶液于4℃左右,故需将烧杯和搅拌器一起移人4℃冰箱中。④透析 结合完毕后,将标记的球蛋白溶液离心(2500
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