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- 文献和实验
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RT
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见标签
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999
- 供应商:
鹿森生物
- 规格:
50G

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文献和实验。 4、低温原则 所取样本离体后,应尽快置于干冰或 -80℃ 冰箱中,并保证在实验前始终处于 -70℃ 以下, 以避免外泌体降解。 二、样本制备指南 1、细胞上清 1) 细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间,贴壁细胞密度在 70%-80%,悬浮细胞密度在 60%-70%; 2) 对于贴壁细胞,去除原有培养基,加入适量的 PBS 缓冲液冲洗一次,彻底去除血清;对于悬浮细胞,300 g ,4℃,10 min 收集细胞,然后换为新的不含外泌体的培养基或者无血清替代培养基继续培养 24-48 h, 根据细胞
培养 24 - 48 h,细胞汇合度达到 80% - 95% 左右时收取上清,该上清液即可用于提取外泌体。 使用外泌体专用无血清培养基: 待细胞汇合度~50%时,移去原有完全培养基,添加新培养基进行培养,新培养基由 50% 外泌体专用无血清培养基 + 50% 完全培养基组成; 待细胞生长汇合度约为70-80%时,移去培养基; 使用1×PBS溶液将细胞润洗2-3次; 加入外泌体专用无血清培养基继续培养24 - 48 h,待细胞汇合度到 80% - 95% 时收取细胞培养上清液,该上清液即可用于外泌
值最好接近 72℃ GC 含量(composition)过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的 GC 含量不能相差太大。另外,上下游引物的 Tm 值(melting temperature)是寡核苷酸的解链温度,即在一定盐浓度条件下,50% 寡核苷酸双链解链的温度。有效启动温度,一般高于 Tm 值 5-10℃。 若按公式 Tm=4(G+C+2(A+T)估计引物的 Tm 值,则有效引物的Tm为 55-80℃,其 Tm 值最好接近 72℃ 以使复性条件最佳。 4、引物 3' 端要避开密码
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