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999
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鹿森生物
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25G

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文献和实验200ml PEG6000 40% 37.21 4.0g 20g 40g 60g 80g H2 O mQ 62.79 6.75g 33.75g 67.5g 101.25g 135.0g p=1.075. PMSF (store at -20o C) Conc. Stock 20ml C7 H7 FO2 S 100mM 174.2g/M
或者乙二醇降低极性,这样溶解就会好得多,此外你也直接加2%的PEG这样也降低极性,同时保护你的蛋白,你再做纯化就可以了,我以前遇到这样的蛋白是用10%的乙醇加3-5%的PEG5000,这样的情况下蛋白还是活性回收率很高,我觉得那些表面活性剂能不用还是不用的好,你失去活性你可以监测一下提取,纯化,酶切到底哪里失去了活性,这样更容易解决你的问题。还有注意缓冲液PH值,看看改变它对溶解度有没有影响。蛋白有沉淀那你可以稍微把蛋白的浓度降低点,这也是个办法。 2) 请问楼主有没有合成过配体为FMN的亲和
沉淀,我用0.5%CHAPS助溶可勉强溶解部分,目的蛋白疏水性比较强。既然是疏水性很强你可以加点甘油或者乙二醇降低极性,这样溶解就会好得多,此外你也直接加2%的PEG这样也降低极性,同时保护你的蛋白,你再做纯化就可以了,我以前遇到这样的蛋白是用10%的乙醇加3-5%的PEG5000,这样的情况下蛋白还是活性回收率很高,我觉得那些表面活性剂能不用还是不用的好,你失去活性你可以监测一下提取,纯化,酶切到底哪里失去了活性,这样更容易解决你的问题。还有注意缓冲液PH值,看看改变它对溶解度有没有影响。蛋白
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