氢化双酚 A（异构体混合物）,80-04-6，416517-

蛋白定量技术

）4.04.04.04.04.04.04.04.04.04.04.0试剂蛋白 含量（mg）8.07.26.45.64.84.03.22.41.60.80注：1%牛血清白蛋白，经凯氏定氮测定含纯蛋白为80%。⑶ 混匀后于室温放置0.5h～1h，光电比色（540nm），顺序由低浓度至高浓度，每管测3次，求其平均值。⑷ 以OD值为纵坐标，蛋白含量为横坐标绘制标准曲线。4．样品测定⑴ 取样品0.1ml，加生理盐水1.4ml。也可将样品做1-10稀释加1ml，再加生理盐水0.5ml。⑵ 加双缩脲试剂4.0ml

ELISA 实验样本处理方法

细胞可以省略该步骤。 2） 将细胞悬浮液收集到离心管中，在2-8℃下以1000×g离心5分钟，然后吸去培养基，用预冷PBS洗涤细胞3次。 3） 加入适量的预冷PBS（建议在使用前立即加入蛋白酶抑制剂）重悬细胞。在6孔培养板（约1×106个细胞）中，每个孔加入150-250μL的PBS来重悬细胞。 4） 使样本在-20℃或-80℃条件和室温条件下反复冻融，重复冻融过程数次，直至细胞完全裂解。也可以使用超声波细胞破碎器超声处理悬浮液来裂解细胞。 5） 2-8℃下以1500×g离心10分钟，去除细胞碎片，收集

PCR 引物设计小技巧，你 get 了吗？

的。引物设计的要求： （1）避免重复碱基，尤其是 G。 （2）Tm=58-60 度。 （3）GC=30-80%。 （4）3' 端最后 5 个碱基内不能有多于 2 个的 G 或 C. （5）正向引物与探针离得越近越好，但不能重叠。 （6）PCR 扩增产物长度：引物的产物大小不要太大，一般在 80-250bp 之间都可；80-150bp 最为合适（可以延长至 300 bp）。 （7）引物的退火温度要高，一般要在 60 度以上；要特别注意避免引物二聚体和非特异性扩增的存在。