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999
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联硕生物
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100MG

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文献和实验蛋白质纯化实验中,将会测定 b-glucuronidase (GUS) 的活性,是利用 p-nitrophenyl b-D-glucuronide 为基质,加入酵素反应后所释出之 p-nitrophenol 在碱性下呈现黄色,可测定 415 nm 之吸光度,利用 Beers Law 即可计算求得反应物之生成量。 本实验将利用已知浓度之 p-nitrophenol,测定其 A415,以求取 p-nitrophenol 在 GUS 活性测定条件下之 消光
表现出来的酶GUS可以水解其基质衍生物pNPG,所产生的黄色生成物p-nitrophenol,可供活性测定 (Jefferson et al, 1986);仪器用具:ELISA光度计 (Dynatech);微量滴定盘 (microtiter plate, Nunc F96 Maxisorb 442404)药品试剂:基质溶液 (GUS reaction buffer):pNPG (p-nitrophenyl β-D-glucuronide, Sigma N-1627) 31.5 mg溶于
Histochemical detection重组质体的检定
操作原理与colony hybridization 相同,但是将滤膜移置于含有IPTG 及5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide (X-Gluc) 的培养基。 X-Gluc 可被GUS作用而释出蓝色的产物,若转型株所带的质体接有gus 基因的重组质体,则应可在IPTG 的诱导条件下表现出蛋白质,若此重组蛋白质具有GUS 活性,可将进入菌体的X-Gluc 分解而使菌落呈蓝色。 仪器用具: 平端镊子 药品试剂: Nitrocellulose
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