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RT
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见标签
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999
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联硕生物
- 规格:
500ML

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文献和实验入20.9g MOPs,放在磁力搅拌器上溶解。再加1.86g EDTA二水二钠,放在磁力搅拌器上溶解。用1M灭过菌的NaOH 调PH至7.0(约用NaOH 40ml),用DEPC 处理过的去离子水定容至500ml,装入棕色瓶中,写好标签,室温避光保存。4、5 × 甲醛变性胶加样缓冲液(5×loading buffer): 配制10ml。预先配制水饱和的溴酚蓝溶液:在1.5ml 离心管中加入约0.1mg溴酚蓝,加入1ml DEPC水溶解,充分振荡溶解,离心,可见离心管底部有溴酚蓝粉末剩余,上层液体
有黑点。 方法4 免疫印迹 1样品制备和蛋白定量 1.1 容液配制 10ml100mmol/L PMSF:0.1742g溶于10ml的异丙醇中,至与4?C保存。 50ml 5mol/L NaCl:14.61g溶于40ml三蒸水中,定容至50ml。 100ml 20% SDS:20g溶于80ml水中,加热溶解,定容至100ml。 100ml 1mol/LTris-HCl: 12.114g溶于80ml三蒸水中,定容至100ml。 配RIPA裂解
内的,而酶只有在甘油浓度 具体操作如下:在 1.5 mL 离心管中依次加入DNA(1 μg/μl)20 μg10× 酶切 buffer 4.0 μl限制性内切酶(10 U/μl)5.0 μl加 ddH2O 至 500 μl在最适温度下消化 1-3 hr。消化结束时可取 5 μl 电泳检测消化效果。如果消化效果不好,可以延长消化时间,但超过 6 hr 已没有必要。或者放大反应体积,或者补充酶再消化。如仍不能奏效,可能的原因是 DNA 样品中有太多的杂质,或酶的活力下降。消化后的 DNA 加入 1/10
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