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999
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联硕生物
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100MG

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文献和实验免疫荧光组织(细胞)化学技术系列四:荧光素及其标记抗体的方法
乙酰胺、1% BAS和0.1% NaN3),0~4 ℃保存。 4.蓝色荧光素标记抗体方法 Kbaffan 等(1986)首先创立了蓝色荧光素标记和染色技术,可进行双标记或多标记。 (1)取7-氨基-甲基香豆素(7-amino-4-methyl coumarin,AMC)260 μg溶于二甲亚砜25 μl中。 (2)将上液加入10 ml IgG-巴比妥缓冲液(0.5 mol/L,pH 8.5,内含50~100 mg IgG)中,室温反应2 h,过Sephadex G-50除去游离荧光素, 最大荧光波长430
400μl(1.7mg/ml)加到500μl反应混合液中,室温反应12h,加入100μl的50mmol/L碘乙酸钠封闭残余巯基,在4℃用PB透析过夜。加入 0.01%NaN3分装,4℃保存半年。(3)PE-标记蛋白A方法1)取4.08mg PE 溶于0.1mol/L pH 7.4 PB(含0.1mol/L NaCl)1ml中,溶解后, 取出0.5ml,再加入10μl SPDP无水甲醇液(2.6mg/ml),SPDP/蛋白摩尔比为10, 22℃反应5min,过Sephadex G-50(1×17cm
)首先创立了蓝色荧光素标记和染色技术,可进行双标记或多标记。 (1)取7-氨基-4-甲基香豆素(7-amino-4-methyl coumarin, AMC)260μg溶于二甲亚砜25μl中。 (2)将上液加入10ml IgG的 巴比妥缓冲液(0.5mol/L,pH8.5,内含50~100mg IgG)中,室温反应2h,过Sephadex G-50除去游离荧光素。 AMC呈黄色结晶固体,最大吸收波长354nm,最大荧光波长430nm。 三、荧光抗体质量控制 对制备
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