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RT
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见标签
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999
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联硕生物
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100MG

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文献和实验铁丝筐)。【试剂】1. 3%茚三酮试剂 称3g茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml容量瓶里,贮于棕色瓶中。此试剂应放在冷凉处,不宜久放,使用期约10天。2. 氰酸盐缓冲液(按以下方法配制):(1)NaCN贮备液0.01mol/L(490mg/L)。(2)醋酸缓冲液:称360g醋酸钠(含三分子结晶水)溶于约300ml无氨蒸馏水中,加66.67ml冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至1L。取溶液(1)20ml,用溶液(2)定容到1L。3. 标准氨基酸 精确称取在80℃下烘干的亮氨酸13.1mg(或α-丙氨
)。每板设对照(加100(储存液100 1640)。2)置37℃,5%CO2孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。3)每孔加入10 ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4 h。(悬浮细胞推荐使用WST-1,培养4 h后可跳过步骤4),直接酶联免疫检测仪OD570nm(630nm校准)测量各孔的吸光值)4)离心(1000转x10min),小心吸掉上清,每孔加入100 ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD570nm(630nm校准
疑问。所以使用孵育3-4h的条件。 2、MTT是琥珀酸脱氢酶的人工底物,底物浓度过高可能导致酶抑制,当然,MTT是否有此作用值得实验验证,但大多数酶的底物浓度过高时会产生酶的抑制作用(直接的抑制作用)。 问:我的MTT是用PBS配的,5mg/ml,因为每孔的溶液量为100ul,所以我加了10ul。现在我的调零孔孵育4小时后为黄色,但是加入DMSO之后,还是红色的,490nm下的吸收值为0.2左右。难道是我买的培养基或是血清有问题,我用的是GIBCO的1640培养基,杭州四季青的血清。 丁香
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