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见标签
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999
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联硕生物
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1G

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文献和实验胍 25mol/L柠檬酸钠pH 7.0 0.5%(w/v)N-十二烷基肌氨酸(Sarkosyl) 0.1mol/L巯基乙醇(2-ME) 其它溶液: 2mol/L乙酸钠 (NaAc) 缓冲液 (pH 4.0) 水饱和酚(pH 3.5) 49∶1 (v/v) 氯仿/异戊醇 100%异丙醇 70%乙醇(用DEPC处理水配制) DEPC处理后高压灭菌水 试验程序 1.取0.5~1g左右新鲜植物组织置于研钵中,加入液氮,迅速研磨成均匀的粉末。 2.
)的DEPC处理水中,检测后分装,置于-70℃低温条件下保存。 注意事项 RNA提取 过程中,为了保证所提取的RNA的纯度和完整性,其中有两个方面的问题需要特别控制,一是去除与RNA结合的蛋白质,二避免内外源Rnase对RNA的降解。在RNA的提取中,常采用的蛋白质变性剂有苯酚、氯仿、十二烷基磺酸钠(SDS)等。为防止外源Rnase的污染,所有试验用品均需用DEPC处理并高压灭菌,所有试剂配制均需使用经DEPC处理过的水或灭菌处理。内源RNase的抑制采用异硫氰酸胍等强还原剂
(一)原理细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在。因此,提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS)的缓冲液中,加等体积水饱和酚,通过剧裂振荡,然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于水相,被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相,或者在两相界面处形成凝胶层。本实验采用的0.15mol/L 缓冲液系统可使大部分RNA-蛋白复合物解离,而DNA-蛋白复合物只有极少部分解离;用酚处理时DNA-蛋白复合
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