三苯甲烷,519-73-3，101303-100G

在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略

.1991,19:155-162 102.Olins PO,Rangwala SH.Gene.1988,73:227-235 103.Olins PO,Rangwala SH.J Biol Chem.1989,264:16973-16976 104.McCarthy J E G,Schairer H U,Sebald W.EMBO J.1985,4:519-526 105.McCarthy J E G,Sebald W,Gross G.Gene.1986,41;201-206 106

在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的全攻略

在E.coli中表达外源基因的应用。 在E.coli表达系统中作用比较强、应用较广的一个启动子是噬菌体T7晚期启动子[72,73]。该系统的活性依赖于提供T7 RNA多聚酶的转录单元。RNA多聚酶的严格阻遏对防止T7启动子的渗漏是必需的。有许多用于调节T7多聚酶表达的途径，但每一种方法都有其各自的缺陷。Merten等通过构建一基于λPL调节的反转衰减T7 RNA多聚酶表达盒阐明了这一问题。可以通过在启动子和编码T7多聚酶的基因之间插入三个串联排列的转录终止子来削弱T7多聚酶的基础表达水平。在诱导

抗原的制备

的0.5%pH6.5的萘二磺酸水溶液（g/V）中匀浆后加入等量90%（g/V）苯酚水溶液（内含0.1%8-羟基喹啉）在2℃振荡提取30min。 　　酵母tRNA的提取：100g酵母（湿重）加入200ml水，300ml 90%苯酚水溶液，振荡2h,4℃冰箱中过液，使之提取完全。 　　以上介绍了用冷酚法提取各种RNA的一些实例，近来还有皂土酚法（即除苯酚外还加入皂土吸附蛋白质）提取RNA，据报道比普通酚法提取RNA的生物活性高10倍左右。但应用苯酚法提取核酸时，须注意市售苯酚常含有少量